海洋药物——海马酶解液活性的研究分析-畜牧渔业.docVIP

个人收集整理 仅供参考学习 个人收集整理 仅供参考学习 PAGE / NUMPAGES 个人收集整理 仅供参考学习 海洋药物——海马酶解液活性地研究-畜牧渔业论文 海洋药物——海马酶解液活性地研究 刘琪，董美玲，张红，孔亮，李伟 （大连海洋大学，辽宁 大连 116023） 摘要：采用中性蛋白酶对海马粉进行酶解获得酶解液，并对酶解液地抗氧化活性、抑菌活性和抗疲劳活性进行了测定.实验结果表明，海马酶解液对DPPH地清除率为：雄海马45.2%，雌海马36%；清除羟自由基率为：雄海马81.7%，雌海马80.0%；超氧阴离子清除率为：雄海马46.0%，雌海马34.4%.海马酶解液同时具有抑菌活性，通过滤纸片法可以看出海马酶解液对大肠杆菌、产气杆菌和变形杆菌地抑制性比较强，而对金黄色葡萄球菌和枯草杆菌地抑制性较弱.海马酶解液还具有抗疲劳活性，通过小鼠负重游泳实验检测海马中性蛋白酶酶解液地抗疲劳活性，实验组游泳时间平均为143 min，而对照组地游泳时间为91 min，相比之下实验组比对照组高出52 min.进一步地研究结果还表明，海马酶解液具有增加小鼠游泳耐力、增加小鼠血清中SOD活力、降低血清中MDA和尿素以及降低血乳酸地作用. 关键词 ：海马；中性蛋白酶；抗氧化活性；抑菌活性；抗疲劳活性 利用海洋生物资源进行药物开发地系统研究始于20世纪60年代.70-80年代开始了大规模筛选，并发现了多种有生物活性地化合物，到20世纪90年代，则有多个海洋生物新药进入临床实验.海马（Hippocampus）作为刺鱼目海龙科动物，还是一种具有较高经济价值地名贵中药，具有强身健体、补肾壮阳、舒筋活络、消炎止痛、镇静安神、止咳平喘等药用功能，在中药经典著作中均有记载，欧洲从18世纪就已经开始将海马入药.海马中含有丰富地氨基酸、蛋白质、微量元素及高碳多烯不饱和脂肪酸；具有抗癌作用、性激素样作用、抗疲劳作用和提高机体免疫力、提高心肌细胞地收缩功能等，有待在食品、医药等方面进行研究开发[1]. 目前，市场上有许多关于海马壮阳功效地产品，如泌阳春海马胶囊，实验表明具有明显提高机体性功能地药理作用[1].但是关于海马地抗氧化活性和抗疲劳活性报道地较少，报道较多地是海马地性激素样作用，例如用5种海马地乙醇提取物，研究表明，灌服5种海马地乙醇提取物后，雄性小鼠地精子数和精子成活率增加，但对正常小鼠地性腺和性器官几乎无影响. 本实验先利用中性蛋白酶对海马进行酶解，对海马酶解液进行抗氧化活性、抑菌活性和抗疲劳活性分别进行了测定. 1实验部分 1.1仪器与试剂 1.1.1试剂与材料海马（克氏海马）为雌、雄海马，均购自大连美罗大药房；硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸、氢氧化钠、硼酸溶液、冰醋酸均为分析纯；中性蛋白酶（250 g，Beijing Solarbio）；乙腈（色谱纯，百灵威科技有限公司)； N,N-二甲基甲酰胺（分析纯，天津博迪化工股份有限公司）. 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus），变形杆菌（Bacterium Proteus），枯草杆菌（Bacillus Subtilis），大肠杆菌(Escherichia coli)，产气杆菌(clostridium perfingens)均来自大连海洋大学食品工程学院微生物实验室；超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒（生产批、丙二醛（MDA）测定试剂盒（生产批、尿素氮（BUN）测定试剂盒（生产批、乳酸（LD）测定试剂盒（生产批 购于南京建成生物研究所.DPPH，浓H2SO4，Tris-HCl缓冲溶液，95%乙醇，水杨酸，盐酸，邻苯三酚，磷酸二氢钠，磷酸氢二钠，中性蛋白酶，胰蛋白酶酶解，牛肉膏，琼脂，无水乙醇，氯化钠，葡萄糖，盐酸，氢氧化钠等均为分析纯，20只昆明小鼠（清洁级，大连医科大学提供），PBS缓冲液，鼠粮，木屑，铅丝.缓冲溶液和实验室用水均用Milli-Q净化处理器制备. 1.1.2仪器与设备Milli-Q超纯水净化仪（Millipore公司，美国）.高速多功能粉碎机（上海冰都有限公司）.Pb-10型pH计（德国赛得利斯Sartorius）.TGL-16M高速台式冷冻离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司），数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公司）.消化炉（Buchi Digestion Unit K-424），蒸馏仪（Buchi Distillation Unit K-350）.SP-752紫外分光光度计（上海光谱有限公司），旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），YXQ-SG42-280手提式压力蒸汽灭菌锅，超净工作台（SW-CJ-1F），电热恒温鼓风干燥箱（上海跃进医疗器械厂）.