犬乳腺上皮细胞的分离培养与鉴定-学报编辑部-华南农业大学.PDF

　华南农业大学学报　２０１５，３６（６）：３５３８ ｈｔｔｐ： ｘｕｅｂａｏ．ｓｃａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ ∥ 　　　　　　　　　　 　ＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｄｏｉ：１０．７６７１／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１４１１Ｘ．２０１５．０６．００６　 胡静思，袁　榕，李守军，等．犬乳腺上皮细胞的分离培养与鉴定［Ｊ］．华南农业大学学报，２０１５，３６（６）：３５３８． 犬乳腺上皮细胞的分离培养与鉴定 胡静思，袁　榕，李守军 （广东省兽医临床重大疾病综合防控重点实验室／华南农业大学兽医学院，广东广州５１０６４２） 摘要：【目的】建立方便、经济的犬乳腺上皮细胞体外培养方法，用于犬乳腺癌的研究．【方法】以新产犬乳汁为材 料，离心并收集乳汁中细胞，进行分离培养．用ＣＣＫ８法绘制细胞生长曲线，细胞角蛋白８免疫荧光染色鉴定上皮 细胞．【结果和结论】试验材料培养后第３天即可见岛屿状的细胞克隆并伴有少量吞噬细胞．继续培养至单克隆细 胞汇合后，可见细胞呈典型的石铺路状，单层平铺生长，且在细胞表层产生乳滴，细胞传代后吞噬细胞消失．ＣＣＫ８ 结果显示，细胞生长曲线呈“Ｓ”型．细胞免疫荧光结果显示，细胞角蛋白８呈阳性．表明从犬乳汁中可以分离培养出 高纯度、生长迅速的犬乳腺上皮细胞．本试验建立了短时间内获得大量纯犬乳腺上皮细胞的方法． 关键词：犬乳汁；乳腺上皮细胞；体外培养；角蛋白８； 中图分类号：Ｓ８５７．４　　　　　　文献标志码：Ａ　　　　　文章编号：１００１４１１Ｘ（２０１５）０６００３５０４ Ｃｕｌｔｕｒｅａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｍａｍｍａｒｙｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｉｎｃａｎｉｎｅｍｉｌｋ ＨＵＪｉｎｇｓｉ，ＹＵＡＮＲｏｎｇ，ＬＩＳｈｏｕｊｕｎ （ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＣｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄＣｏｎｔｒｏｌｆｏｒＳｅｖｅｒｅＣｌｉｎｉｃａｌＡｎｉｍａｌＤｉｓｅａｓｅｓｏｆ ＧｕａｎｇｄｏｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅ／ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６４２，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｎｉｎｖｉｔｒｏｍｏｄｅｌｏｆｃａｎｉｎｅｍａｍｍａｒｙｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｆｏｒｔｈｅｓｔｕｄｙｏｆ ｔｈｅｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ．【Ｍｅｔｈｏｄ】Ｔｈｅｃｅｌｌｓｗｅｒｅｓｅｐａｒａｔｅｄｆｒｏｍｃａｎｉｎｅ ｍｉｌｋａｎｄｃｕｌｔｕｒｅｄ．ＴｈｅｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈｃｕｒｖｅｗａｓｄｅｓｃｒｉｂｅｄｕｓｉｎｇｔｈｅＣＣＫ８ａｓｓａｙ．Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｙｔｏｋ ｅｒａｔｉｎ８ｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｕｓｉｎｇｃｅｌｌｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｍａｍｍａｒｙｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ．【Ｒｅｓｕｌｔａｎｄ ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】Ａｆｔｅｒｃｕｌｔｕｒｅｄｆｏｒ３ｄａｙｓ，ｔｈｅｃｅｌｌｓｗｅｒｅｃｌｏｎｅｄｗｉｔｈａｓｈａｐｅｌｉｋｅａｔｙｐｉｃａｌｉｓｌａｎｄ，ａｎｄｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅａｌｓｏａｆｅｗｐｈａｇｏｃｙｔｅｓ．Ｃｕｌｔｕｒｅｄｆｏｒａｆｅｗｍｏｒｅｄａｙｓ，ｔｈｅｃｅｌｌｓｂｅｇａｎｔｏｃｏａｌｅｓｃｅａｎｄｆｏｒｍｍｏｎｏｌａｙ ｅｒｓｗｈｉｃｈｃｏｕｌｄｓｅｃｒｅｔｅｌａｃｔｏｇｅｎｅｓｉｓｄｒｏｐｓ．Ｔｈｅｐｈａｇｏｃｙｔｅｓｖａｎｉｓｈｅｄａｆｔｅｒｓｅｖｅｒａｌｐａｓｓａｇｅｓ．Ｔｈｅｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈｃｕｒｖｅｗａｓｓｉｍｉｌａｒｔｏａ“Ｓ”