沉默TCF7L2对胰岛素抵抗HepG2细胞胰岛素降解酶表达的调控作用观察.PDF

　 军 杂 2015年2月1 日　第40卷　第2期 110 解放 医学 志　 论　著 沉默TCF7L2对胰岛素抵抗HepG2细胞胰岛素降解酶表达的 调控作用观察 夏佳佳，郑晓雅，刘婵，胡钰梅，任伟 [摘要]　目的　探讨沉默转录因子7类似物2(TCF7L2)对胰岛素抵抗(IR)HepG2细胞胰岛素降解酶(IDE)表达的调 控作用及可能机制。方法　将HepG2细胞分为空白组、TCF7L2干扰组、空载体组、IR组、IR+TCF7L2干扰组、IR+空 载体组。采用高浓度胰岛素(5 ×10-6mol/L)持续作用24h诱导IR模型(IR-HepG2细胞)生成。以人TCF7L2 mRNA 编码序 列为干扰靶点构建TCF7L2特异性小干扰RNA慢病毒载体(LV-TCF7L2-siRNA)转染空白组及IR组细胞，空载体病毒转 染空载体组及IR+空载体组细胞。qRT-PCR法检测各组细胞TCF7L2及IDE mRNA 的表达，Western blotting 检测各组细胞 TCF7L2 、IDE 、胰岛素刺激后蛋白激酶B(AKT) 、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达的变化，流式细胞术检测各组2- 脱氧-D-葡萄糖(2-NBDG)荧光葡萄糖摄取率。结果　与空白组比较，IR组细胞葡萄糖消耗量及2-NBDG摄取率均明显 降低(P 0.01) ，证明IR细胞模型建立成功。qRT-PCR及Western blotting 结果显示，IR组TCF7L2及IDE mRNA种蛋白表达 水平均明显低于空白组(P 0.05) ，TCF7L2干扰组TCF7L2 、IDE mRNA和蛋白表达水平较空白组、空载体组明显下降， IR+TCF7L2 干扰组TCF7L2 、IDE mRNA 和蛋白表达水平较IR组、IR+空载体组均明显下降(P 0.05) 。生理剂量胰岛素 刺激后，IR组、IR+TCF7L2干扰组p-AKT 蛋白水平较空白组明显下降(P 0.01) ，各组总AKT 水平差异无统计学意义。 TCF7L2干扰组2-NBDG荧光葡萄糖摄取率较空白组和空载体组明显下降，IR+TCF7L2干扰组2-NBDG荧光葡萄糖摄取率 较IR组、IR+空载体组明显下降(P 0.01) 。结论　TCF7L2联合IDE致肝细胞IR ，其机制可能与减少胰岛素信号通路关键 酶p-AKT蛋白的表达有关。 [关键词]　糖尿病，2型；胰岛素抗药性；转录因子7样蛋白2 ；胰岛素溶酶 [中图分类号]　R587.1　　　　[文献标志码]　A　　　　[文章编号]　0577-7420(2015)02-0110-07 [DOI]　10.11855/j.issn.0577-7402.2015.02.05 Regulation effect of TCF7L2 gene silence on the expression of insulin degrading enzyme in insulin resistant HepG2 cells * XIA Jia-jia, ZHENG Xiao-ya, LIU Chan, HU Yu-mei, REN Wei Department of Endocrinology, First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University, Chongqing 400016, China * Corresponding author, E-mail: weiren67@ This work was supported by the M edical Science and Technology R esearch Project of Chongqing Health Bureau (2008-2-96), the M inistry of Education Fund Project (20135503120001), and the National Key Clinical Specialties Construction Program of China (2011) [Abstract]　Objective　To evaluate the effects of transcription factor 7-li