微生物学实验精选课件.pptVIP

六、技术关键 固定时烘烤适度，太轻会在冲洗时冲走细菌，过度会破坏细胞形态；脱色时间严格控制，脱色不够造成假阳性，脱色过度会出现假阴性；选用新培养的菌种，图片不能太厚。 七、实验结果 7.1 根据观察结果，绘出两种细菌的形态图。 7.2列表简述两株细菌的染色结果(说明各菌的形状、颜色和革兰氏染色反应)。 坚持 八、思考 1、使用油镜应注意哪些问题？载玻片和镜头之间滴加香柏油有什么作用？ 2、为什么在实验高倍镜和油镜时应特别注意避免粗调节器的误操作？ 3、进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色会出现什么问题? 坚持 实验6 微生物细胞平板计数 1 目的 1.1 了解血球计数板的构造和计数原理 1.2 掌握用血球计数板测定微生物细胞总数的方法。 坚持 2 原理 测定微生物细胞数量的方法很多，通常采用的有显微直接计数法和平板计数法。 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区，计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。 但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。计数区边长为1mm，则计数区的面积为l mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。 使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。 坚持 缺点： 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察； 坚持 3 材料 3.1 器械 显微镜、血球计数板、盖玻片（22mm×22mm）、吸水纸、计数器、滴管、擦镜纸。 3.2 菌种 培养48h的啤酒酵母菌悬液。 4 流程 检查清洗计数板→稀释样品→加样→计数→计算→清洗 坚持 三、实验内容 （一）培养基配置 共配置3种培养基，分别为细菌、霉菌、放线菌，配方见培养基配方资料。 配置过程： 1.称量 ：按培养基配方比例依次准确地称取药品。可溶性淀粉先用少量热水溶化后再加入其他成份，补足所需水分，混匀后加入琼脂。 2. 溶化：反复煮沸2-3次，保证琼脂均匀溶化。 3.调pH 4.分装： 将溶化的固体培养基趁热加至漏斗上，装试管时，注意管口不要沾上培养基。液体分装装量不超过试管的1/4，固体分装装量不超过试管的1/3，分装三角瓶的量不超过三角瓶容积的一半，半固体分装装量为试管的1/3，灭菌后垂直待凝。 坚持 5.加棉塞：培养基分装完毕后，在试管口或三角瓶口塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能，然后包扎一层牛皮纸。试管应先捆成一捆后再于棉塞外包扎牛皮纸，贴上标签，注明培养基名称、日期、组别。 6. 为了保证实验顺利进行，要求把实验用器皿清洗干净。保持灭菌后无菌状态，需要对培养皿、吸管等进行妥善包扎。试管和三角瓶要做棉塞。这些工作看来很普通，如操作不当或不按规定要求去做，会导致实验的失败。因此应看作是微生物实验的基本操作。 坚持 （二）微生物分离实验准备 每小组准备带有玻璃珠的90ml无菌水1瓶（用250ml的三角瓶和蒸馏水），9ml无菌水6管（用试管和蒸馏水）。 坚持 （三）器皿包扎为了灭菌后仍保持无菌状态，各种玻璃器皿均需洗净后包扎。 1、培养皿 洗净烘干后每10套叠在一起，用牢固的纸卷成一筒，以免散开，然后进行灭菌。到使用时在无菌室中才打开取出培养皿。 2、试管和三角瓶 试管和三角瓶都要作合适的棉花塞。棉花塞的作用是起过滤作用，避免空气中的微生物进入试管或三角瓶。棉花塞的制作要求使棉花塞紧贴玻璃壁，没有皱纹和缝隙，不能过松，过紧易挤破管口和不易塞入，过松易掉落和污染。棉花塞的长度不少于管口直径的二倍，约2/3塞进管口。若干支管用绳子扎在一起，在棉花塞部分外包，油纸或牛皮纸再在纸外用绳扎紧。三角瓶每个单独用油纸包扎棉花塞。（演示）。 坚持 （四）高压蒸汽灭菌锅湿热灭菌。 操作方法： 1、在灭菌锅中盛蒸馏水直至高水位灯亮；将用试管分装好的培养基、包装好的培养皿等玻璃器械放入灭菌器内； 2、旋紧上盖，设定灭菌条件：103kPa，121.3℃，开始灭菌； 3、加热，打开排气活门，放出冷空气（一般在水沸后排气5分钟左右），关闭放气活门，使压力逐渐上升至103kPa，温度达121.3℃，维持20分钟后，排气至压力显示“0