从重组融合蛋白包涵体中释放大环肽过程优化-超声波细胞粉碎机.PDF

第 26卷第6期 生物技术 26(6)：593 2016年 12月 Biotechnology Dec．，2016 从重组融合蛋白包涵体中释放大环肽过程优化 张晓杰 ，徐鸿涛 ，陈启助 ，罗利琼 ，沈娟 ，廖斌 ，张军 (1．广东药科大学，广东省生物技术候选药物重点实验室 ，生命科学与生物制药学院，广东广州510006； 2．中山大学生命科学学院，广东 广州510275) 摘要：[目的]探索不同条件对包涵体复性的影响，优化重组融合蛋 白包涵体中释放大环肽的工艺条件。[方法] 对纯化后的包涵体进行不同变性液、透析方式及是否超声破碎处理的比较 ；并在此基础上探讨不同透析温度、谷胱甘 肽浓度与L—Arg浓度对大环肽产量的影响。采用Tanon凝胶分析系统与紫外吸收法对大环肽的产量进行分析。[结 果]使用8mol／L的尿素溶解包涵体后 ，获得的上清液在25~C条件下，在含有 1mmol／LGSH、0．1mmol／LGSSG、0．8 mmol／LL—Arg的透析液中进行梯度透析，其得率为每克包涵体获得约 1．4mg大环肽。[结论]成功从包涵体中获得 大环肽并优化工艺条件。 关键词：大环肽 ，包涵体，大环肽一内含肽一几丁质结合域 ，重组表达融合蛋白 中图分类号：Q786 文献标识码：A DOI：10．16519／j．cnki．1004—31lx．2016．06．0099 Processoptimizationofdissolvingrecombinantcyclotide——fused proteininclusionbodiesforreleasingcyclotide XiaojieZhang ，HongtaoXu，QizhuChen，LiqiongLuo，JuanShen，BinLiao，JunZhang (1．SchoolofBiosciencesandBiopharmaceutics，GuangdongProvinceKeyLaboratoryfor BiotechnologyDrugCna didates，GuangdongPharmaceuticalUniversity，Guangzhou510006，China； 2．SchoolofLifeScience，SunYat—senUniversity，Guangzhou510257，China) Abstract：[Objective]Thisstudyaimstooptimizetheconditionsofakindofcyclicpeptides，cyclotides，releasedfromtheir fusedeyclotide—intein—CBD (chitin—bindingdomain)proteinsbyexploringtheeffectsofdifferentconditions．[Methods] Firstly，purifiedinclusionbodiesweretreatedwithorwithoutultrasonicationwhileitdissolvedby6mol／L guanidineHC1or8 mol／Lurea．Secondly，dialyzedthedissolvedproteinsinthedialysissolutionofwhichwithgraduallydecreasingconcentrations ofureaunderdifferenttemperatures．Thirdly，onthebasisoftheaboveconditions，dialyzedthedissolvedproteinsinthedialysis solutionofwhichcontainingdifferentconcentrationsofGSI-I／GSSG andL—Arg．Fin