人vWF-A1区蛋白的表达及其对血小板聚集的抑制作用3.PDF

中国病理生理杂志 　Chinese Journal of Pathophysiology 　2004 ,20 ( 1) :47 - 50 ·47 · ( ) [文章编号] 　1000 - 4718 2004 01 - 0047 - 04 人 vWF - A1 区蛋白的表达及其对血小板聚集的 抑制作用 1 2 1 1 1 1 1 1 祝怀平 , 　王迎春 , 　白 　霞 , 　季顺东 , 　张 　威 , 　邵波静 , 　朱明清 , 　阮长耿 ( 1苏州大学附属第一医院 ,江苏省血液研究所 ,江苏 苏州 215006 ; 2 南通医学院附院 ,江苏 南通 217004) ) 　　[摘 　要] 　目的 :进一步研究血栓形成的机制 ,开发抗血栓药物。方法 : 应用基因重组技术在大肠杆菌中表达 ( ) 人 vWF - A1 区蛋白 ,经过纯化、复性 ,获得重组蛋白 rvWF - A1 , 同时用流式细胞术检测rvWF - A1 与血小板膜糖蛋 ( ) ( ) 白血小板膜糖蛋白 glycoprotein , GP Ib 的结合能力 ,应用血小板聚集仪测定 rvWF - A1 对瑞斯托霉素 ristocetin 诱导 的血小板聚集抑制作用。结果 : 重组表达载体 pQE - 31 - vWF - A1 在大肠杆菌 M15 中得到高效表达 ,表达的重组蛋 白量占菌体总蛋白的30 % ,Ni - NTA agrose 柱纯化后 ,其纯度为 95 % ,经复性的 rvWF - A1 蛋白具有良好的生物学活 性。它可与血小板模糖蛋白血小板膜糖蛋白 GPIb 结合 , 阳性率为 786 % ; 它可以抑制 ristocetin 诱导的血小板聚集 , 抑制率为 847 % 。结论 : 在原核细胞中可以成功地高效表达人 vWF - A1 区蛋白 ,该重组蛋白有可能开发为有效的 抗血栓药物。 [ 关键词] 　血栓形成 ;血小板 ;von Willebrand 因子 　　[ 中图分类号] 　R363 　　　　　[文献标识码] 　A 　　血栓性疾病是严重危害人类健康的疾病之一。 菌 TG1 、M15 由本室保存。 研究血栓形成的机制 ,开发天然和人工合成的抗血 2 　酶及主要试剂 栓药物进而抑制血栓形成是血栓与止血研究领域的 限制性内切酶 Hind Ⅲ,BamH Ⅰ;T4 DNA 连接酶 ; ( Taq Plus I DNA 聚合酶 , dNTP , 均为 Promega 公司产 方向之一。血管性血友病因子 von Willebrand factor , ) ( ) vWF 是血栓形成过程中的一个重要相关蛋白 ,在初 品。抗5 ×组氨酸 5 ×Histone 单抗和次氨基三乙酸 ( ) 期止血过程中 , 它通过血小板膜表面的 vWF 受体 镍琼脂糖 Ni - NTA agarose QIAGEN 为公司产品。