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课件:高效液相色谱法药大.ppt
续前 3.洗脱方式 1)等度洗脱(恒组成溶剂洗脱) 以固定配比的溶剂系统洗脱组分(一个泵) 类似GC的等温度洗脱 2)梯度洗脱: 在一定分析周期内不断变换流动相的种类和比例 即不断改变其极性(两个泵) 适于分析极性差别较大的复杂组分 类似GC的程序升温(沸程较长样品) 图示 第五节 高效液相色谱仪 1.泵: 恒压泵:流量精度不稳 恒流泵:常用 2.进样装置 1)隔膜进样(高分子有机硅胶垫→进样室) GC系统压力较小,可以 HPLC系统压力太大,必须停泵进样(早期) 2)阀进样:不必停泵,六通阀 续前 3.色谱柱:直径4~6mm,柱长10~30cm 柱效评价:色谱系统适应性试验 R,n,fs(拖尾因子) 柱再生:维护、保养、柱子的冲洗 4.检测器 1)紫外检测器:适于吸收紫外光的物质 2)荧光检测器:只能分析自身发光的物质 灵敏度高 3)示差折光检测器:利用折光率的差别 灵敏度低,温度要求严格 4)电化学检测器 5)化学发光 后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 资料仅供参考,实际情况实际分析 主要经营:课件设计,文档制作,网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 秉着以优质的服务对待每一位客户,做到让客户满意! 致力于数据挖掘,合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面,打造全网一站式需求 * * * 第十三章 高效液相色谱法 第一节 概述 高效液相色谱法:以气相色谱为基础,在经典液相 色谱实验和技术基础上建立的一种液相色谱法 一、HPLC与经典LC区别 二、HPLC与GC差别 三、高效液相色谱仪流程图 四、特点 一、HPLC与经典LC区别 主要区别:固定相差别,输液设备和检测手段 1.经典LC:仅做为一种分离手段 柱内径1~3cm,固定相粒径100μm 且不均匀 常压输送流动相 柱效低(H↑,n↓) 分析周期长 无法在线检测 2.HPLC:分离和分析 柱内径2~6mm,固定相粒径10μm(球形,匀浆装柱) 高压输送流动相 柱效高(H↓,n↑) 分析时间大大缩短 可以在线检测 二、HPLC与GC差别 相同:兼具分离和分析功能,均可以在线检测 主要差别:分析对象的差别和流动相的差别 1.分析对象 GC:能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品, 高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及 高聚物的样品不可检测 占有机物的20% HPLC:溶解后能制成溶液的样品, 不受样品挥发性和热稳定性的限制 分子量大、难气化、热稳定性差及高分子 和离子型样品均可检测 用途广泛,占有机物的80% 续前 2.流动相差别 GC:流动相为惰性气体 组分与流动相无亲合作用力,只与固定相作用 HPLC:流动相为液体 流动相与组分间有亲合作用力,为提高柱的选择性、 改善分离度增加了因素,对分离起很大作用 流动相种类较多,选择余地广 流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用 选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相 可以增大分离选择性 3.操作条件差别 GC:加温操作 HPLC:室温;高压(液体粘度大,峰展宽小) 三、高效液相色谱仪流程图 1.贮液罐(滤棒,可滤去颗粒状物质) 2.高压泵(输液泵) 3.进样装置 4.色谱柱——分离 5.检测器——分析 6.废液出口或组分收集器 7.记录装置 续前 四、HPLC的特点和应用 “三高” “一快” “一广” 高柱效——n=104片/米,柱效高(远高于一般LC) 高灵敏度 高选择性 分析速度快 应用范围广泛(可分析80%有机化合物) 第二节 基本理论和条件选择 热力学理论:塔板理论——平衡理论 基础 动力学理论:速率理论——Vander方程 一、塔板理论 二、速率理论 三、HPLC法中
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