新的肝脏特异性自身抗原的筛选、克隆、表达的.doc

PAGE PAGE 1 新的肝脏特异性自身抗原的筛选、克隆、表达的 摘要 　　目的：以不明原因肝病患者血清中出现的新的肝脏特异性自身抗体为探针筛选、鉴定新的特异性自身抗体。 　　方法：以间接免疫荧光法检测一不明原因慢性肝病患者血清，发现新的肝脏特异性自身抗体，采用免疫筛选法筛选人肝λTriplExcDNA文库，将所获得的阳性克隆经将获得的阳性克隆进行序列分析后插入表达载体pQE－30并原核表达，经Ni－NTA金属亲和层析法纯化。纯化获得的蛋白经免疫印迹法鉴定。 　　结果：人肝λTriplExcDNA文库经筛选3次，结果获得1个阳性克隆，DNA序列分析的结果经核苷酸BLAST分析，发现该cDNA与基因库中的脂肪酸去饱和酶1（Fattyaciddesaturase1，FADS1）序列有99％的同源性。对原核表达的目的片段，以患者血清为抗体采用免疫印迹方法鉴定，结果显示在分子量28kD左右处出现一阳性带，初步证实该肝脏特异性自身抗体的靶抗原为FADS1。 　　结论：检测发现新的慢性肝病相关性自身抗原FADS1，推测由于患者产生抗FADS1自身抗体致使细胞磷脂膜代谢异常，进一步导致肝功能损伤。 　　关键词：自身免疫性肝病；cDNA文库；免疫筛选 ScreeningandAnalyzingtheUnknownTargetAutoantigeninPatientwithAutoimmuneLiverDiseases 屠小卿②，仲人前③，范列英，朱烨，曾万杰，薛菖 已发表在中国免疫学杂志2005；21（8）：627－628 第二军医大学长征医院实验诊断科、全军临床免疫中心上海200003 TUXiao－Qing，ZHONGRen－Qian，FANLie－Ying，etal DepartmentofClinicalLaboratory，ShanghaiChangZhengHospital，Shanghai200003，China Abstract 　　Objective：TheserumofunknowncausesliverdiseasepatientwasusedastheprobeforimmunoscreeningtheλTriplExcDNAlibrary，inordertoscreeningandanalyzingtheunknowntargetautoantigen. 　　Methods：Usedindirectimmunofluorescenceassay，anunknownautoantibodywasfound.TheserumofthepatientwasusedastheprobeforimmunoscreeningtheλTriplExcDNAlibrary.ConstructingaprokaryoticexpressionvectorpQE－30withtargetclone，thefusionproteinFADS1werepurifiedwithNichelatedaffinitychromatographyfollowedwithgelelutionandrecoveringafterSDS－PAGE. 　　Result：Theisolatedpositiveplaquewaspickedoutfortertiaryscreening.Sequenceanalysiswasperformed，withsoftwareBLAST.TheresultshowedthatthetargetDNAishighly（99％）similartothefattyaciddesaturase1（FADS1）.Wehaveutilizedaproteomicserologicalapproachtoidentifythisdenovoautoantigen.ThemolecularmassoftherecombinantproteinwasdetectedbyWesternblotting，whichwasvisualized28kDproteinband.ThismayindicatethatthetargetliverspecificautoantigenwasFADS1. 　　Conclusion：AsthedenovochronicliverdiseaseassociatedautoantigenFADS1wasdetected，wepredictedthattheprogressiveliverdysfunctionmightduetotheabnormallecithoidmembranemetabolic，whichwascausedbytheexpressionoftheautoantibody