血液分析仪试剂作用原理及对检测结果的影响.doc

PAGE PAGE 1 血液分析仪试剂作用原理及对检测结果的影响 【摘要】目的概述血液分析仪试剂的作用原理以及对检测结果的影响。 【关键词】血液分析仪试剂检测结果 血液分析仪准确结果的实现，需要各种配套试剂的辅助，没有试剂的血液分析仪不可能得到任何检测结果，因此试剂是血液分析仪测量过程的重要组成部分。 血液分析仪试剂主要由稀释液、鞘液、溶血素、染液、清洗剂等组成。其中三分类血液分析仪通常是由单一的溶血素和稀释液、清洗剂三种试剂组成，五分类血液分析仪则需要多种试剂相互配合使用来达到不同的检测目的，本文主要就三分类、五分类血液分析仪试剂作用原理以及对检测结果的影响做以下阐述。 一、三分类血液分析仪试剂作用原理及对检测结果的影响 1、稀释液 1.1稀释液作用原理 a)稀释血液细胞，防止血液细胞聚集和粘连； b)保持稳定的pH、rho;、OS等理化指标：根据仪器设计理念不同，稀释液的理化指标有很大的差异，不同的仪器在用电阻法原理(图1)测量样本时，设定的脉冲信号阈值不尽相同（稀释液区分为高渗、等渗、低渗），因此同一份样本在不同仪器上直方图fl不同。以RBC直方图为例，灵敏度高的仪器配以理化指标稳定且范围精确的稀释液，可以将横坐标控制在60-150fl，反之，横坐标将会延伸到30-200fl甚至更宽，直方图会发生左移或者右移。 图1 1.2稀释液对检测结果的影响 稀释液是血液分析仪所有的测量环节都需要用到的试剂，稀释液的理化指标不合格,对仪器所有的检测结果都会造成影响。常见影响有PLT本底高，WBC分类不好，HCT漂移（HCT是检验试剂质量的重要指标之一），由于MCV、MCH、MCHC是计算参数，因此对MCV、MCH、MCHC的检测结果也会造成严重影响。 2、溶血素 2.1溶血素作用原理 a)溶解红细胞，以利于白细胞计数：在以电阻法计数的三分类血液分析仪中，红细胞体积和白细胞体积有重合的区域，而且红细胞的个数是白细胞个数的近一千倍，因此在对白细胞进行电阻法计数时，必须加入溶血素，破坏掉红细胞，才能准确地对白细胞进行计数。 b)作用于白细胞膜，可使白细胞膜穿孔，胞浆流失（检测内核），胞浆流失后的白细胞中，因为只剩下细胞核，淋巴细胞最小，单核细胞稍大，中性粒细胞反而以大细胞形式存在。这样在电阻法对白细胞进行三分类的白细胞直方图上淋巴细胞在图形最左边区域，单核细胞在中间区域，粒细胞在直方图最右边区域。（如图2） 图2 c)检测血液中血红蛋白浓度： 目前国际血液标准委员会(ICSH)推荐的测试血液中血红蛋白的参考方法是氰化高铁(HiCN)法，所以大多数血液分析仪均采用氰化高铁法检测血红蛋白。当稀释的血液加入溶血素后，红细胞溶解，释放血红蛋白，后者与溶血素当中的氰化钾反应，形成氰化高铁血红蛋白溶液，进入血红蛋白测试系统，在特定波长（一般在530-550nm）下比色，吸光度的变化与样本中血红蛋白含量成正比。 近年来，为了减少溶血素的毒性，避免含氰血红蛋白衍生物检测后的废物处理，有些血液分析仪使用非氰化溶血素（如SLS）。实验证明，形成的衍生物与HiCN吸收光谱相似，实验结果的精确性、CV值、线性达到含有氰化物溶血素同样水平，既保证了实验质量，又避免了污染。 2.2溶血素对检测结果的影响 溶血素试剂质量主要通过吸收峰波长、吸光度、PH值、空白值这几个指标来反映。吸收峰波长、吸光度不符合要求，会导致比色法测量HGB出现偏差。如果溶血素溶血不完全，则会造成红细胞没有被完全破坏，部分红细胞被当作白细胞计数，造成白细胞计数结果偏高。同时红细胞释放的血红蛋白反应不完全，导致仪器比色检测血红蛋白浓度时，造成结果失真。反之，溶血速度过快，在仪器规定测量血红蛋白时间之前，吸收峰波长和吸光度已经开始漂移，同样会造成血红蛋白及白细胞计数结果失真。 3、清洗剂： 3.1清洗剂的作用原理 清洗剂主要是清除管道、计数池、检测小孔周围的蛋白沉积、污染。根据仪器的设计理念不同，可以在每次测试后使用或者关机时使用。目前市场上流行的清洗剂质量良莠不齐，价格差距也很大。一般来讲，血液分析仪清洗剂应含有活性酶，活性酶对去除管道以及计数池的蛋白沉积效果显著，但是由于含活性酶的清洗剂成本比不含酶的高很多，且保质期短，因此市场上含酶清洗剂的价格要比不含酶清洗剂的价格贵很多。 3.2清洗剂对检测结果的影响 清洗剂质量好坏的指标主要通过空白值和洗净率来反映。清洗剂空白值影响仪器的本底空白检测，洗净率则是反映清洗剂对仪器管路、计数池的清洁能力。清洗剂效果的好坏需要一段时间才能显示出来。长期使用质量差的清洗剂，会导致水路系统管道变色、变性、发硬、堵塞，会造成液体流通速度以及压力的改变，检测结果漂移，在每日做室内质控时会发现质控结果呈单方向漂移，系统误差显著。同时仪器的堵孔率也会增加，白细