脑脊液的显微镜检查.doc

PAGE PAGE 1 脑脊液的显微镜检查 一、细胞总数 1、直接计数法如脑脊液标本比较清亮或微混，可用此方法。 用滴管吸取已混匀的脑脊液标本少许，直接滴入细胞计数板，充入计数池内，静置2~3分钟，低倍镜下计数两个池内的四角和中央大格共10个大格内的细胞数，即为1μl脑脊液中的细胞总数（红、白细胞总数）。在书写报告时，再换算成每升脑脊液中的细胞总数。 2、稀释计数法如果脑脊液的细胞过多、混浊或带血的脑脊液可用血红蛋白毛细吸管吸取混匀的脑脊液20μl，加入有红细胞稀释液0.38μl的小试管中，混匀后滴入计数池内，用低倍镜计数4个大方格的细胞总数，乘以50，即为每微升脑脊液的细胞总数，最后换算成每升脑脊液的细胞总数报告。 二、白细胞计数 1、直接计数非血性标本，用吸管吸取冰乙酸后全部吹出，使管壁仅附着少许冰乙酸，然后用同一吸管吸取少量混匀的脑脊液标本，数分钟后红细胞就会完全溶解，再滴入计数池内，按上法计数。 2、稀释计数如白细胞过多，可用白细胞稀释液稀释后，按上法计数，注意计数结果应乘以稀释倍数。 3、血性标本的校正计数混有血液的脑脊液标本混匀后，用1%的冰乙酸溶液稀释后仍按上法计数。为了剔除因出血而带来的白细胞，可用下式进行校正。 每微升CSF内白细胞校正数=每微升CSF未校正的白细胞数－ 三、白细胞分类计数 1、直接分类法在白细胞直接计数后，转高倍镜观察，依据细胞形状和细胞核的形态进行分类，共计数白细胞和内皮细胞100个，分别计算单个核细胞和中性粒细胞所占的比例，以百分数表示。如白细胞总数不足100个，则直接写出单个核细胞和中性粒细胞的具体数字。如白细胞总数在30以下，可不做直接分类计数或改用染色分类计数。 2、染色分类法脑脊液标本离心，取沉淀涂片，制成均匀薄膜，置室温或37℃孵箱中，干燥后以瑞氏染色，油镜下进行分类计数。以百分比表示之。如有内皮细胞，则另行描述报告。 四、注意事项 （1）脑脊液细胞计数应及时进行，一般应在1小时内进行。如放置过久，细胞会破坏或沉淀与纤维蛋白凝集成块，导致计数不准确。标本须混匀后方可进行计数，否则影响结果。 （2）穿刺损伤血管，导致血性脑脊液，此时细胞总数已无意义，白细胞计数也须校正后才有意义。 （3）细胞计数时，如发现较多的红细胞有皱缩或肿胀现象，应予以描述，以协助临床医生鉴别陈旧或新鲜出血。 （4）细胞计数时，须注意把红细胞或淋巴细胞与新型隐球菌相区别： A、新型隐球菌具有“出芽”现象，不溶于乙酸，滴加0.35mol/L的乙酸后，显微镜下仍保持原形，而红细胞则被乙酸溶解消失，淋巴细胞则胞核和胞浆更为明显。 B、滴加印度墨汁一滴，加盖玻片，高倍镜下见新型隐球菌有夹膜，不着色，而红细胞或淋巴细胞无此现象。 （5）细胞计数板用完后，应用75%的酒精消毒60分钟。忌用苯酚消毒，因有损计数池的刻度。 五、正常参考值 正常人脑脊液中无红细胞，仅有少量白细胞。 成人：（0~8）×106/L 儿童：（0~15）×106/L 脑脊液中细胞多为淋巴细胞及大单核细胞，两者之比约为7：3，偶见内皮细胞。 六、临床意义 1、中枢神经系统病变的脑脊液，细胞数可增多，其增多的程度及细胞的种类与病变的性质有关。 2、中枢神经系统病毒感染、结核性或霉菌性脑膜炎时，细胞数可中度增多，常以淋巴细胞为主。 3、细菌感染时如化脓性脑膜炎，细胞数显著增加，以中性粒细胞为主。 4、脑寄生虫病时，可见较多的嗜酸性粒细胞。 5、脑室或蛛网膜下腔出血时，脑脊液内可见多数红细胞。 6、细胞数增减程度和细胞种类与某些疾病的程度有关，如化脓性脑膜炎经过有效的抗生素治疗后，细胞总数迅速下降；结核性脑膜炎患者在早期以中性分叶核细胞为主，以后则淋巴细胞较多；脑血管意外病人脑脊液中的红细胞数目减少，结合临床，预示着出血既将停止或已经停止。 七、病原体形态学检查 1、细菌临床怀疑流行性脑脊髓膜炎或化脓性脑脊髓膜炎时，应做细菌学涂片检查。操作如下： （1）脑脊液标本2~3ml，以3000rpm离心15分钟，去上清液，将沉淀物涂在洁净玻璃片上，共制片2张，涂片自然或在37℃温箱中干燥固定，且勿用火焰固定。 （2）涂片固定后，一张用亚甲蓝染色，另一张用革兰氏染色。 （3）革兰氏染色涂片用于检查肺炎双球菌、流感杆菌、葡萄球菌、绿脓杆菌、链球菌、大肠杆菌等，亚甲蓝染色用于检查脑膜炎双球菌。如找到细菌，则按其染色性质及形态报告。 （4）如怀疑结核性脑膜炎，可将脑脊液标本静置24小时，取其液面薄膜涂片，置37℃温箱中干燥固定，作抗酸染色，油镜下找抗酸杆菌。 （5）采集标本时应注意污染。显微镜观察时应注意细胞内外的细菌形态，报告时应予以描述。 2、真菌检查