组织因子、凝血酶受体和血栓调节蛋白在胰腺癌.doc

PAGE PAGE 1 组织因子、凝血酶受体和血栓调节蛋白在胰腺癌 【摘要】　目的　研究组织因子(TF)、凝血酶受体(TR)和血栓调节蛋白(TM)在胰腺癌细胞中的表达。方法　采用细胞培养、免疫细胞化学和Northern印迹分析方法。结果　每个抗原都在细胞膜及(或)细胞浆中有特征性的免疫反应，TF和TR主要在细胞浆，TM在细胞膜。TR表达越多，TM表达越少。TRmRNA在野生型胰腺癌细胞株中表达，凝血酶和水蛭素均降低TRmRNA的表达量。凝血酶可致人胰腺癌细胞株MiaPaCa-2和Panc-1DNA合成增加(P＜0.05)，在凝血酶刺激0.5和6h时达高峰。结论　胰腺癌细胞的TF、TR和TM表达参与了胰腺癌的血液高凝状态。 Expressionofthrombinreceptorwithtissuefactorandthrombomodulininhumanpancreaticcancercells CHENGJun,ZHUGuojing,DINGYitao,etal. 　　(DepartmentofSurgery,TheDrumTowerHospital,NanjingUniversityMedicalCollege,Nanjing210008,China) 　　【Abstract】ObjectiveTostudytheexpressionoftissuefactor(TF),thrombinreceptor(TR)andthrombomodulin(TM)inhumanpancreaticcancercells.MethodsHumanpancreaticcarcinomacelllines(n=4)werestudiedbyusingcellculture,immunocytochemistryandNorthernblottinganalysis.ResultsBothTFandTRwerepredominantlycytoplasmicindistribution,TMwasmembranelocalized.ThehigherTRexpression,thelowerTMexpression.TRmRNAwasexpressedin4pancreaticcancercelllines(CaPan-2,MiaPaCa-2,Panc-1andBxPC-3).ThrombinandhirudindecreasedtheTRmRNAexpression.ThrombintreatmentincreasedDNAsynthesisofMiaPaCa-2andPanc-1cells.ConclusionTheexpressionofTF,TRandTMmighttakepartinthepathogenesisofhypercoagulablestateinpancreaticcancer. 　　【Keywords】Cell,cancer,pancreatic;Tissuefactor;Thrombinreceptor;Thrombomodulin 　　胰腺癌有较高的弥漫性血管内凝血和血栓性并发症的发病率。我们采用细胞培养、免疫细胞化学、Northern印迹分析等，研究组织因子(TF)、凝血酶受体(TR)和血栓调节蛋白(TM)在人胰腺癌细胞中的表达，探讨凝血酶和水蛭素对胰腺癌细胞DNA合成的影响。材料和方法 　　1.细胞培养：人胰腺癌细胞株MiaPaCa-2、Panc-1、BxPC-3和CaPan-2常规用RPMI1640含体积分数为10%小牛血清(FCS，Gibco)及1%L-谷氨酰胺和1%青、链霉素培养，维持在37℃含体积分数为95%O2和5%CO2的湿培养箱内。细胞贴壁形成单层后，用胰蛋白酶-EDTA(Gibco)贴壁，再用磷酸盐缓冲溶液(PBS液)洗。 　　2.免疫细胞化学检测：肿瘤细胞(3×104个)在玻片上生长过夜，细胞贴于玻片，PBS淋洗，室温干燥后将玻片-20℃保存至免疫染色。丙酮固定，浸于含体积分数为0.3%过氧化氢(H2O2)甲醇中。检测抗原的抗体有：(1)TF：TF多克隆抗体(伦敦血栓研究所，TRI)为兔抗人TF抗体；(2)TR：TR单克隆抗体(剑桥大学)为兔抗人TR抗体；(3)TM：TM单克隆抗体(Dako)，为鼠抗人TM抗体。取60μl抗体(1∶50稀释)滴于玻片上，室温孵育1.5h，加猪抗兔或兔抗鼠IgG(Dako)再孵育1.0h(1∶300稀释)；PBS洗后再加ABC复合物(Dako，10mg/L抗生物素蛋白+2.5mg/L生物素-过氧化物酶)孵育45min；随后3，3′-二氨基联胺(DAB)和体积分数为0.03%H2O2进行颜色反应，再苏木素复染。阴性对照，PBS代替第一抗体。染色密