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小鼠多瘤病毒荧光PCR检测方法的建立 及其在裸嚴鼠感染情况调查中的应用
李晓波付瑞王淑菁卫礼贺争鸣王吉岳秉飞
中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所
摘要:
口的建立多瘤病毒荧光定量PCR检测方法,并对裸嚴鼠屮多瘤病毒感染情况进 行调查。方法比较NCBI中小鼠多瘤病毒(Genbank:NCo01515)的核酸序列,选 择保守区域设计引物和探针,建立多瘤病毒的荧光定量PCR方法,对方法的敏 感性和特异性进行验证。人工感染9只1日龄KM乳鼠,21 d后采集心、肝、脾、 肺、肾、脑、胸腺、盲肠内容物和血液等组织脏器,用建立的荧光PCR方法进行 检测,验证方法在应用屮的有效性,最后用该方法检测62份裸嚴鼠的盲肠内容 物样本。结果建立的检测方法特异性好,在以多瘤病毒为模板时出现明显的荧 光信号,以猴空泡病毒、小鼠K病毒、小鼠微小病毒和大鼠细小病毒H-1株为模 板时无荧光信号出现;方法的最低检出限为100 copies/uL;人工感染小鼠的心、 肝、脾、肺、肾和盲肠内容物中均检测到多瘤病毒核酸,其中肺组织中含量最高, 脑、胸腺和血液屮未检出;62份裸髏鼠的肓肠内容物样本经检测多瘤病毒为阴 性。结论建立的多瘤病毒荧光定量PCR方法可有效检测动物组织中的多瘤病毒, 对裸嚴鼠口然感染多瘤病毒的调查为实验用裸嚴鼠微生物标准的制定提供了参 考。
关键词:
多瘤病毒;裸嚴鼠;小鼠;荧光定量PCR方法;
作者简介:李晓波(1980-),男,副研究员,研究方向:实验动物病毒学。 E-mail:lxb8493059@163. com。
作者简介:岳秉飞(I960-),男,研究员,研究方向:实验动物学。
E-mail:y6784@126. com。
作者简介:王吉(1974-),女,副研究员,研究方向:实验动物学。
E-mail:wj_nd_jds@sina? com。
收稿日期:2017-05-05 基金:国家科技支撑计划“普通级封闭群裸露鼠种群的建立及耐低氧机制的初步 研究” (2015BAI09B02)
Establishment of a fluorescence quantita/tive PCR assay for murine polyomavirus detection and its use in the detection in naked mole rats
LI Xiao-bo FU Rui WANG Shu-jing WEI Li HE Zheng-ming WANG Ji YUE Bing-fei
Institute of Laborstory Animal Resources,
National Institutes for Food and Drug Control;
Abstract:
Objective To establish a fluorescence quantitative PCR assay for polyomavirus and to apply this technique in the investigation of its inf ecti on rate in n eiked mole rats- Met hods To compare the nucleic acid sequence of murine polyomavirus ( Gcnbank: NCo01515) in NCBI and design primers and probes in its conserved region. To establish a fluorescence quant itavive PCR met hod for polyomavirus and evalua te the sensitivity and specif ici ty of the method. To infect nine one~day old KM strain suckl ing mice, and to collect samples of the heart,liver, spleen,lung, kidney, brain, thymus, cecal contents and blood at 21 days after infection. The efficacy of the method was validated by detecting the virus in organs. 62 cecal samples from naked mole rats were tested by the established assay. Resul Is There was obvious fluorescen
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