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畜牧微生物学 河北北方学院动物科技学院 徐 彤 教授 徐明举 讲师 实验九 病毒的血凝（HA） 和血凝抑制（HI）试验 一、实验目的与要求 二、实验原理 三、实验材料 四、实验内容及操作 1.掌握血凝和血凝抑制试验的原理、操作技术和结果判定。 2.学会血凝和血凝抑制试验的在病毒鉴定、疾病诊断和免疫监测中的应用。 某些病毒具有凝集动物红细胞的能力，称为病毒的血凝作用，利用这种特性设计的试验称为血凝试验（HA） ，以此来推测被检材料中有无病毒的存在；而病毒的血凝作用可被特异性抗体所抑制，即血球凝集抑制试验（HI） 。 通过HA –HI试验，可用已知血清鉴定未知病毒，也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。 鸡新城疫病毒鸡胚尿囊液，1%鸡红细胞悬液，生理盐水，鸡新城疫阳性血清， 96孔“V”形微量反应板，50μL微量移液器等。 （一）血球凝集试验（HA） 以新城疫病毒为例 1.取96孔“V”形微量反应板第一排和第二排1-12孔各加生理盐水50μL。 2.于第一排第1孔加50μL病毒液，混匀后取50μL至第2孔，混匀后取50μL至第3孔，依次倍比稀释至第12孔，吸弃去50 50μL ，各孔经倍比稀释后稀释度依次为2-1-2-12 。第二排不加病毒液，为红细胞对照孔。 3.第一排和第二排自右至左依次向各孔加1%鸡红细胞悬液50μL，置微型震荡器震荡1min，使血球与病毒充分混合，在37℃恒温箱中（或室温）作用15-30min，待对照孔红细胞已沉降可观察结果。 图9-2：血球凝集试验（HA）操作流程 4.结果判定：以能使等量红细胞悬液发生完全凝集（血球呈颗粒性伞状凝集沉于孔底）的病毒最高稀释倍数，即为该病毒血凝价，即HA效价，即一个血凝单位，用2n表示。不凝集者红细胞沉于孔底呈点状。 （二）血球凝集抑制试验（HI） 以新城疫病毒和新城疫阳性血清为例 1.根据HA试验结果，确定病毒的血凝价，配成4个血凝单位的病毒溶液。 2.取96孔“V”形微量反应板，第一排、第二排和第三排1-12孔各加50μL生理盐水。 3.于第一排第1孔加50μl被检血清，混匀后取50μL至第2孔，混匀后取50μL至第3孔，依次倍比稀释至第12孔，吸弃去50 50μL ，各孔经倍比稀释后稀释度依次为2-1-2-12 。 4.第一排和第二排1-12孔依次加50μL 4个血凝单位的病毒溶液。第三排1-12孔依次加50μL 鸡新城疫阳性血清为阳性血清对照。在微型震荡器震荡1min，充分混合，置37℃恒温箱中（或室温）作用15-30min。 5.第一、二、三排1-12孔依次加1%鸡红细胞悬液50μL ，混合均匀后，置37℃恒温箱中（或室温）作用15-30min，待第二排红细胞完全凝集和第三排红细胞已沉降可观察结果。 图9-4：血球凝集抑制试验（HI）操作流程 6.结果判定：第二排为病毒对照，红细胞应全部凝集，第三排为阳性血清对照，红细胞应全部沉降。以被检血清能完全抑制病毒凝集红细胞的最高稀释倍数为该被检血清的血凝抑制效价，用2n表示。 1.通过血凝试验，可以检测被测病毒是否具有血凝特性，如有，而且可以测出该病毒液的血凝价。 2. 通过血球凝集抑制试验，可用已知血清鉴定未知病毒，进行传染病的病原学诊断，也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量，进行免疫监测和传染病的血清学诊断。 1.所用器材应洁净，无细菌、尘埃污染。 2.加样应准确，减少误差。 3.1%红细胞悬液应新鲜，无溶血现象。 4.应在规定的时间内观察结果，以免判定错误。 1.书写实验报告。 2.思考病毒的血凝试验和血凝抑制试验的在临床中的应用。 * * 畜牧微生物学 厚德 远志 笃学 创新 畜牧微生物学 厚德 远志 笃学 创新 畜牧微生物学 厚德 远志 笃学 创新 五、注意事项 六、实验结论 七、课下作业 【授课内容】 畜牧微生物学 厚德 远志 笃学 创新 【实验目的与要求】 畜牧微生物学 厚德 远志 笃学 创新 【实验原理】 畜牧微生物学 厚德 远志 笃学 创新 图9-1：病毒的血凝和血凝抑制示意图 畜牧微生物学 厚德 远志 笃学 创新 【实验材料】 畜牧微生物学 厚德 远志 笃学 创新 【实验内容及操作】 畜牧微生物