实验四放线菌.docVIP

实验四 放线菌、霉菌形态观察 一、 实验目的 学习并掌握观察放线菌、霉菌形态的基本方法。 初步了解放线菌和四类常见霉菌的基本形态特征。 二、基本原理 放线菌（原核微生物）：  由不同长短的纤细的菌丝所形成的单细胞菌丝体。菌丝体分为两部分，即潜入培养基中的营养菌丝（或称基内菌丝）和生长在培养基以上的气生菌丝。有些气生菌丝分化成孢子丝，呈螺旋形、波浪形或分枝状等。孢子常呈圆形、椭圆形或杆状。气生菌丝及孢子的形状和颜色常作为分类的重要依据。 培养和观察方法 扦片法：在放线菌平板上扦上盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻片上。观察时直接取出盖玻片置于载玻片上镜检。 镜检：用镊子拔出盖玻片，擦去背面培养物，将有菌的一面朝上置于载玻片上，直接镜检。 宜用略暗光线观察，低倍镜—高倍镜；染色后观察效果更好。 玻璃纸法：将玻璃纸覆盖在平板表面，接种放线菌、培养，放线菌在玻璃纸上形成菌苔。观察时取下玻璃纸固定在载玻片上镜检。 镜检：先在载玻片上滴一小滴水，取下玻璃纸，使菌面朝上，使玻璃纸平贴于载玻片上。 优点：可观察到放线菌自然生长状态下的特征，和不同生长期的形态。 注意:整过程勿触动菌面培养物。 印片法：将要观察的放线菌的菌落或菌苔直接印在载玻片上，经染色后观察。 用接种铲或解剖刀将平板上的菌苔连同培养基一起切下，菌面朝上。另取一载玻片，微热后，轻轻按压菌苔，固定，染色后镜检。 主要用于观察孢子丝的形态，孢子的排列及其形状等，但形态特征可能有所改变。 霉菌（真核微生物）：  霉菌是一类可产生复什分枝的菌丝体的真核微生物的统称。分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比放线菌粗的多。 培养和观察方法 载玻片法：将培养基薄层置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，霉菌即在其间的有限空间内沿盖玻片横向生长。观察时直接将载玻片镜检。 玻璃纸法：与放线菌相似。 直接制片观察法：用解剖针挑取少量培养物置于预先滴加乳酸石炭酸棉蓝染色液中，制成霉菌制片镜检。 50％乙醇用于洗去孢子；尽可能保持霉菌生长状态；避免产生气泡。 特点：细胞不变形；不易干燥，易保存；防止孢子飞散；增强反差。 三、实验器材 1、菌种 放线菌划线平板28℃,7天后培养物，曲霉、根霉、青霉和毛霉划线平板28℃ 2、仪器 显微镜； 3、其他材料 平皿，载玻片，解剖针，香柏油，二甲苯，擦镜纸，吸水纸，染色缸等。 四、操作步骤 观察放线菌气生菌丝和基内菌丝的区别取插片一片，直接在显微镜下进行观察，注意分界面两侧菌丝形态的差异 观察黑根霉菌丝情况和子囊孢子情况（着重辨认孢子囊、包囊梗、假根）： 观察毛霉菌丝和分生孢子着生情况： 观察黑曲霉菌丝分隔情况和分生孢子着生情况（着重辨认分生孢子梗、足细胞和分生孢子）： 分生孢子梗顶端膨大成圆形或椭圆形的顶囊，由顶囊向外辐射长出一层或两层小梗，最上层小梗呈瓶状，在其顶端生成成串的分生孢子。 观察青霉菌丝和分生孢子着生情况： 五、实验报告 记录所观察到的放线菌基内菌丝和气生菌丝的差别 绘图表示曲霉、根霉、青霉和毛霉的形态特征 思考题： （1）镜检时，如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝？ （2）你注意根据哪些形态特征来区分上述四种霉菌