山西边城酒大曲中优势霉菌分离与形态鉴定.docxVIP

山西边城酒大曲中优势霉菌分离与形态鉴 摘要：本研究对山西边城酒大曲样本进行初步分 离、纯化，获得2种霉菌：L1和L2o显微镜形态观察鉴定 发现：L1菌株的菌落颜色为灰黑色、有细长皱褶、形状不规 则、形态较大，L2菌株的菌落颜色为白色、菌丝呈放射状、 形态较大，且L1和L2都可看到帚状的分枝和膨大的胞子囊; 对2个菌株进行生理生化研究鉴定表明：利用氮源方面，两 个菌株在含有酵母粉和牛肉膏的培养基中生长较好；利用碳 源方面，2个菌株都能利用葡萄糖、半乳糖以及麦芽糖，但 是都不利用蔗糖。通过对边城酒的优势霉菌的检测，为边城 酒生产过程中综合质量的提高提供理论依据；为酒曲生产工 艺的改进提供理论基础。 关键词：边城酒；霉菌；酒曲；分离和鉴定 中图分类号：TS262. 3文献标识码：A 前言 我国的酒类繁多，各具特色，并且我国酒文化的历史源 远流长、酿酒技术历史悠久，早在夏朝时期就有历史记载。 酿酒的关键在于酒曲，酒曲可分为：麦曲、大曲、小曲、红 曲、魏曲［1-2］ o对于边城酒的相关研究可以提高边城酒的 生物营养价值，以及边城酒的综合质量［3］。 1材料与方法 1.1实验材料 山西省大同市天镇县边城酒酒厂提供。 1.2培养基的制备 查氏基础培养基：硝酸钠3,磷酸氢二钾lg、氯化钾 0. 5g、蔗糖30g、琼脂15g、水IL、pH4.7。在121°C下灭菌 30mino 提供碳源培养基：葡萄糖、麦芽糖、硝酸钠lg、磷酸氢 二钾1. 3g、磷酸氢二鞍0. 5g.硫酸钠0. 8g.水lLo在121°C 下灭菌30mino 提供氮源培养基：硫酸铁0.8,蛋白脓、酵母粉、硝酸 钠lg、亚硝酸钠lg、水1L。在121°C下灭菌30mino PDA培养基：（去皮马铃薯、琼脂、水、葡萄糖）；取去 皮处理干净的马铃薯200g,切成小块，加入水lOOOmL后煮 沸30min左右，用多层纱布过滤，取滤汁，再依次加入琼脂、 糖分装于试管中。再在121°C下灭菌30mino 麦芽汁琼脂培养基：（干大麦、水、琼脂）；取干净干大 麦泡在水中培养获得较长麦芽，把干麦芽捣碎糖化后过滤， 获得滤汁，再加入琼脂形成培养基。再在121下灭菌30mino 麦芽汁液体培养基：（干大麦、水）；取干净干大麦泡在 水中培养获得较长麦芽，把干麦芽捣碎糖化后过滤，获得滤 汁，然后在121工灭菌30min,再进行分装，即可形成培养 1. 3实验步骤 1.3. 1酒曲菌悬液的制备 用电子天平准确称取3g由酒厂提供的酒曲样品，研磨 捣碎，放入有300mL的无菌蒸馅水的锥形瓶中摇匀5?10 min。再用5层纱布过滤，获得不含沉淀等杂质的清澈酒曲 菌悬液。分别配制出浓度为：10%、1%、0.1%、0.01%、0. 001% 的无菌酒曲菌悬液。 1. 3. 2涂布培养 取5个无菌培养皿，都倒入温度冷却至5(TC左右的培养 基15niL,取不同浓度梯度的无菌菌悬液0. lmL依次加入到培 养皿中，用无菌涂布棒把菌悬液?均匀，使得菌悬液在培养 基上均匀分布。然后，把以上培养皿都放在37X2恒温培养箱 中培养，观察菌落的形态和生长状况［4］。 1.3.3菌种的分离纯化 等待培养基上长出目的菌后，在无菌操作台中进行以下 实验：在PDA培养基上培养接种的菌落约24h,观察菌落的 生长状况，重复上述无菌接种平板划线分离的方法直到在 PDA培养基上生长出单一的菌落为止。一共获得2种纯化的 单一菌株，并且把这两种纯化的菌株进行编号：LI、L2o再 把这2种编号的菌株再接种到PDA培养基上，在37*恒温培 养箱中进行培养。 1.3.4菌落的显微观察 在纯化的菌株生长24h后取出培养皿，用刀片切下小块 长有菌落的培养基放在载玻片上，再放在显微镜下进行观 察。并且把剩余的培养基继续放在恒温培养箱中培养，定期 取出，进行显微观察［5］。 1.3.5霉菌的鉴定 运用经典微生物分类的方法［6］对霉菌进行分类，根据 霉菌的生态学、形态学和生理学等特征对霉菌进行形态以及 生理生化方面的鉴定［7］。 1.3.6 LI、L2的生物特性 1.3. 6. 1最适生长pH的测定 准确配制pH为2、3、4、5、6、7、8、9的无菌麦芽汁 液体养基，在无菌操作台中，把Lk L2分别用无菌接种的 方式接种到不同的pH培养基上，在37的恒温培养箱中培 养，观察菌株的生长状况［8］。 1.3. 6.2最适生长温度的测定 在无菌操作台中，用无菌接种的方式把LI、L2分别接 种在相同情况的麦芽汁琼脂培养基上。把以上培养基再分别 放在温度设为 15°C、20°C、25°C、30°C、35°C、40°C、45°C、 恒温培养箱中进行培养，观察菌株的生长状况［9］。 1.3. 6.3菌株对于碳源的利用 把不含糖的查氏培养基作为基础培养基，依次在基础培 养基中