农业生物技术试验教学大纲-东北农业大学植物科学与技术试验教学.DOCVIP

PAGE PAGE 1 教学大纲 -基础植物分子生物技术 指导教师：韩英鹏 （一）实验课程简介（实验课程的特点，发展现状） 农业生物技术实验课程的开设，是建立在理论课基础上。在分子水平进行生物学操作是目前很多学科、领域共同关心并十分重视的问题。农业生物技术实验课程就是明确生物技术的一般原理在该实验中所涉及的技术方法，原理和策略，增强学生对生物技术尤其是基因操作中基本原理与技术的认识，并锻炼学生科研动手能力，挖掘其创造意识。随着生物科学和生物技术的日益发展，人们越来越重视对生物学研究手段的了解和掌握。特别是二十世纪八十年代以来，以分子生物学为代表的学科领域取得了翻天覆地的变化。农业生物技术实验开展是东北农业大学农学院农学系专业适应学科发展应运而生的特色课程，将使学生真正了解并深层次体会生物技术的神奇与奥妙。 目前农业生物技术实验课程刚刚开设，实验条件、实验项目开设还处在初级阶段，它的学时数及开设内容还有待进一步丰富。 （二）实验教学目标及基本要求 实验课的培养目标与理论课的培养目标视一致，通过实验课进一步加深对基因操作原理的认识和掌握，从实践的角度让学生掌握基因是怎样去研究的、基因工程是如何实现的，如何设计研究基因的基本方案，为学生进入研究生阶段开展分子生物学研究打好理论和思维基础，为本科毕业从事生物技术和生物科学工作强化基因操作的认识。 （三）教材及主要参考书 农业生物技术实验指导 （四）考核办法 实验结果正确度30% 操作态度30% 实验报告填写20% 动手能力20% （五）开出实验个数：（验证实验 2个；综合实验 个；设计实验1个） （六）应开实验学期：2010-2011学年第一学期 实验项目一 质粒DNA的小量制备 1．实验特点 实验类型：验证 实验类别：专业基础 计划学时：4 每组人数：7 首开日期：2006.6.5 说明：实验类别指基础、专业基础、专业 实验类型指验证、综合、设计。 每组人数指教学实验项目中在每套仪器设备上完成本实验项目的人数。 2．实验目的与要求 学会最常用的小量制备质粒DNA的碱裂解方法。 3．主要仪器设备 序号 主要仪器设备名称 型号规格 数量 1 超净工作台 1 2 旋涡混合器 1 3 恒温摇床 1 4 微量移液取样器 4 4．实验内容提要 通过溶液I、溶液II、溶液III的加入及离心等操作，得到质粒DNA，溶于无菌水中。 5．实验操作要点 取1.5ml的菌液于1.5ml离心管中，12000rpm离心1min，弃上清液，留沉淀备用。 在沉淀中加入100ml 溶液I，盖上盖后立即在涡旋混合器上混匀，室温下静置 加入200ml 溶液II，盖上盖后上下颠倒几次混匀，插入冰中，放置 加入150ml 溶液III，盖上盖后上下颠倒几次混匀，插入冰中，放置 15000rpm离心5min，小心吸取400ml 上清液于另一个干净的1.5ml离心管中，加入800ml 95% 乙醇，盖上盖后立即在涡旋混合器上混匀，室温下静置 15000rpm离心10 min，小心弃掉上清液，加入500ml 70% 乙醇，盖上盖后立即在涡旋混合器上混匀。15000rpm离心10 min ?再加入500ml 70% 乙醇，盖上盖后立即在涡旋混合器上混匀。15000rpm离心10 min ?离心管倒置于37°C培养箱中（或室温）空气干燥。（管底的沉淀质粒DNA 每管加入10m 清理桌面，清洗仪器，撰写实验报告 6．注意事项 （1）试剂添加顺序不能弄混，尤其是溶液I、溶液II、溶液III的加入顺序。 （2）离心时间要控制，使用时离心机要注意对角线上离心管要配平，防止离心机非正常工作。 （3）写作实验报告和实验论文一定要文理通顺、逻辑清晰、图表说明详细，讨论分析透彻（包括操作的错误）。 实验项目二 质粒DNA电泳鉴定 1．实验特点 实验类型：验证 实验类别：专业基础 计划学时：4 每组人数：7 首开日期：2006.6.8 说明：实验类别指基础、专业基础、专业 实验类型指验证、综合、设计。 每组人数指教学实验项目中在每套仪器设备上完成本实验项目的人数。 2．实验目的与要求 学会常用的DNA琼脂糖凝胶电泳。 3．主要仪器设备 序号 主要仪器设备名称 型号规格 数量 1 电泳仪 1 2 分光光度计 1 3 微波炉 1 4 微量移液取样器 4 4．实验内容提要 将实验一所提取的质粒通过1%的琼脂糖凝胶电泳进行检测。 5．实验操作要点 称取0.5g琼脂糖粉，放入三角瓶，加入50ml 1′ TAE电泳缓冲液，放入微波炉中1min，待完全熔化。 冷