荒漠昆虫小胸鳖甲抗冻蛋白MpAFP698对酿酒酵母的低温保护作用.PDFVIP

DOI：10．13995／j．cnki．11—1802／ts．201705007 荒漠昆虫小胸鳖甲抗冻蛋白MpAFP698对酿酒酵母 的低温保护作用 张凤娟，孙琳洁，李素丽，马纪+ (新疆大学生命科学与技术学院，新疆生物资源基因工程重点实验室，新疆乌鲁木齐，830046) 摘 要 昆虫抗冻蛋白作为天然无毒副作用的低温和冷冻保护剂，在发酵菌种的保藏方面具有很好应用前景。 10、30“g／mL的MBP—MpAFP698添加到酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)中，在一7和一20℃冷冻处理酵母菌 液不同时间；以10／LLg／mL的抗冻蛋白在4、0、一50℃处理酵母菌液，在一20。C反复冻融处理，观察菌落形态并 统计菌种存活率。结果表明，添加抗冻蛋白组的酵母存活率显著优于未加抗冻蛋白的对照组，1斗g／mL就有保 护效果，10p,g／mL保护效果最好，说明昆虫抗冻蛋白能以极低的浓度发挥低温保护作用。 关键词 荒漠昆虫抗冻蛋白；酿酒酵母；抗冻保护；细胞存活 抗冻蛋白(antifreeze protein，AFP)是变温生物为蛋白已经被证明具有很好的热滞活性和抗冻保护功 适应严酷的寒冷环境而产生的。抗冻蛋白能够降低 能¨…。研究的目的是找出MpAFP698在不同低温下 溶液的冰点但不改变其熔点，从而产生熔点与冰点之 的保护效果，以及最低有效浓度和有效保护时间。实 间的温度差值，这个差值叫做热滞活性(thermalhys． teresis activity，THA)，其大小用于指示抗冻蛋白的活 性¨。21。AFP的主要功能包括抑制冰晶生长口“1、改 和纯化的融合蛋白，其中MBP是麦芽糖结合蛋白。 变冰晶形态和抑制重结晶o，并且对细胞膜也有保 1 材料和方法 护作用旧““。不同生物的抗冻蛋白活性差异巨大， 其中昆虫抗冻蛋白的热滞活性最高¨“。 1．1 材料 抗冻蛋白在细胞、精液、胚胎和卵巢组织的低温 1．1．1 菌株和质粒 保存中的研究¨””。显示出良好的应用前景。2005 大肠杆菌BL21为本实验室保存，重组质粒 年刘忠渊等发现，赤翅甲抗冻蛋白能够提高细菌的耐 Jun 寒能力Ⅲ。。2015年HakKim发现，一种北极酵 母的抗冻蛋白LelBP可以提高低温储藏细胞的活性，院微生物教研室提供。 缓解重结晶所造成的低温损伤¨“。抗冻蛋白可以改 1．1．2主要试剂 变冷冻发酵面团的质地和烘焙面包的口感¨…，其主 Amylose 要机制是在低温下保护了面团中的酵母菌。 利用昆虫抗冻蛋白作为低温保护剂，无毒副作 自北京经科公司；蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟 X一100和所有层 用，并且昆虫抗冻蛋白由于活性高，使用浓度微量，保 (PMSF)、溶菌酶(1ysozyme)、Triton Pharmacia 存的菌种无需去除保护剂的特殊处理，对食品生产和 析介质均为Amersham Biotech公司产品； 加工尤其有利。我们利用新疆荒漠昆虫小胸鳖甲抗 配制ColumnBuffer(20 mmol／L的NaCl，1 冻蛋白MpAFP698进行酿酒酵母的低温保护研究，该 其余常用试剂为国产分析纯试剂。 第一作者：硕士研究生(马纪教授为通讯作者，E-majiuci@xju