食品中沙门菌PCR检测方法的建立-中国食品卫生杂志.PDFVIP

论著 食品中沙门菌 PCR 检测方法的建立 李业鹏 　钟 　凯 　杨宝兰 　李志刚　刘秀梅 　计 　融 ( 中国疾病预防控制中心营养与食品安全所 ,北京 　10002 1) 摘 　要 :为建立食品中快速检测沙门菌的 PCR 方法 。选取沙门菌属侵袭性抗原保守基因 invA 基因上的靶序列设 + + μ ( ) 计一对引物 ,选择最适 Mg 浓度和退火温度 ,建立最适 PCR 反应体系 ,用 2 %琼脂糖 ,5 l 反应产物 包括 EB ,100 V ,40 min 进行电泳 ,显像 。用该引物对已经传统方法鉴定的22 种 77 株沙门菌和 24 种 24 株非沙门菌进行特异性 检测 ,并对人工污染的食品进行检测条件的研究 。Mg + + 浓度和退火温度对该反应体系的影响较小 ,稳定性较好 ; 经传统方法鉴定的22 种 77 株沙门菌和 24 种 24 株非沙门菌验证了该检验方法具有很好的特异性 ;该检测方法可 2 　 ( ) 以在 19 h 内检出含有沙门菌 10 CFUg 的食品 火腿肠 、鸡蛋 、散装肉馅 。与传统方法比较 ,该方法快速 、敏感 、特 异 ,能在较短的时间内对大量样品同时进行检测 ,适用于食品中沙门菌的快速 、敏感 、特异检测 。 关键词 :聚合酶链反应 ;沙门氏菌属 ;食品; 基因 Polymerase Chain Reaction ( PCR) Method for Detection of Salmonella in Foods L I Yepeng , ZHON G Kai , YAN G Baolan , L I Zhigang , L IU Xiumei , J I Rong (National Institute for Nutrition and Food Safety , Chinese CDC , Beij ing 100050 , China) Abstract : To establish a rapid detection technique for Salmonella in foods by polymerase chain reaction (PCR) . Amplification of nucleotide sequences within the invA gene of Salmonella was evaluated as a means of detecting Salmonella . A collection of 77 strains of Salmonella , isolated mostly from humans and animals in China , and a collection of 24 genera of nonSalmonella bacteria were used for the research of detecting Salmonella in foods by the PCR. Results : ( 1) The PCR method of detecting Salmonella was established , including sample preparation , amplification of Salmonella , DNA extraction , amplification of the DNA and detection of