嘧啶基双光子荧光染料的设计合成与生物成像-应用化学.PDFVIP

第３４卷 第１２期 应 用 化 学 Ｖｏｌ．３４Ｉｓｓ．１２ ２０１７年１２月 　　　　　　　ＣＨＩＮＥＳＥＪＯＵＲＮＡＬＯＦＡＰＰＬＩＥＤＣＨＥＭＩＳＴＲＹ　　　　　　　 Ｄｅｃ．２０１７ 檵檵檵檵殝 檵 殝 殝檵 研究论文殝 檵檵檵檵 嘧啶基双光子荧光染料的设计合成与生物成像    周　佳　倪　 　张承武 　仇兴汉　赵燕菲　白　磊　张高宾 　李　林 （南京工业大学，柔性电子重点实验室＆先进材料研究院，江苏先进生物与化学制造协同创新中心　南京２１０００９） 摘　要　生理条件下光学性质稳定的双光子荧光染料在生物成像领域具有广阔的应用前景。我们使用２，４ 二甲基６羟基嘧啶与４（Ｎ，Ｎ二甲氨基）苯甲醛进行缩合反应，设计合成了具有双光子荧光性质的化合物 ２［（１Ｅ）２［４（二甲氨基）苯基］乙烯基］６甲基４（３Ｈ）嘧啶（ＮＨＰ）。通过质谱（ＭＳ）、核磁共振波谱 （ＮＭＲ）、紫外可见吸收光谱和荧光发射光谱等技术手段表征了其结构，研究了其光物理性质，以及外部环境 改变对其发射光谱的影响。结果表明，化合物ＮＨＰ的最佳吸收峰位于４００ｎｍ，最佳发射峰位于５４０ｎｍ左右， 且荧光发射不受金属离子、氨基酸和ｐＨ等环境因素的影响。生物实验结果表明，化合物ＮＨＰ细胞毒性较小， 且具有很好的活细胞和果蝇脑组织成像效果，是一种较为理想的双光子荧光生物成像染料。 关键词　嘧啶衍生物；双光子成像；荧光探针；生物成像 中图分类号：Ｏ６５７．３　　　　　文献标识码：Ａ　　　　　文章编号：１００００５１８（２０１７）１２１４５００７ ＤＯＩ：１０．１１９４４／ｊ．ｉｓｓｎ．１００００５１８．２０１７．１２．１７０３１９ 荧光成像是生物学研究的重要手段之一，开发具有优良成像效果的荧光染料一直是科学家们研究 的热点。随着荧光染料合成和成像技术的不断进步，传统的单光子荧光材料因其无法回避的缺点已经 不能满足人们对高品质荧光生物成像的要求。例如：短波长激发光会对细胞造成损伤，较短的激发波长 ［１６］ 限制了其穿透深度，激发光容易被细胞或组织吸收，较高的激发光能量加快了染料的光漂白等 。而 以近红外作为激发光的双光子荧光染料，能够同时吸收两个光子从基态跃迁到激发态，最后以辐射跃迁 的方式回到基态，发出荧光，呈现长波激发、短波发射的特点。与单光子荧光染料相比，双光子荧光染料 在生物成像领域具有明显的优势，包括较大的组织穿透深度，较好的空间分辨率和更长的观测时 ［７１５］ 间 。因此，开发适合双光子生物成像的荧光染料具有重要的科学和现实意义。 嘧啶具有较强的电子亲和力和良好的分子平面性，是优异的双光子荧光活性基团，在双光子荧光设 计合成中应用广泛。同时，嘧啶类化合物生物相容性好，细胞毒小，在生物应用领域有独特的优势［１６２７］。 ＋ 然而，由于嘧啶环上Ｎ原子能与金属离子和Ｈ 结合，导致大多数的含嘧啶基荧光染料易于受金属离 子、氨基酸和ｐＨ等干扰，因此其在复杂的生理环境下不能保持稳定的荧光发射，不利于较长时间的成 像观测。到目前为止，如何获得在复杂生理环境中保持稳定荧光发射的含嘧啶基荧光染料，仍有待研 究［２８３１］。果蝇的大脑具有复杂的神经系统和组织，且阻止药物到达中枢神经系统的屏障很弱，药物容易 透过血脑屏障进入大脑，有利于筛选新的具有治疗作用的药物。另外，果蝇具有易饲养、繁殖快、生长周 期短、后代多的特点，且携带了大量与人类的神经功能相关基因相同的基因，实现果蝇３Ｄ成像在生物 医学领域具有重要意义。 本文通过简单途径合成了一种嘧啶基双光子荧光染料２［（１Ｅ）２［４（二甲氨基）苯基］乙烯基］ ６ 甲基４（３Ｈ）嘧啶（ＮＨＰ），测试了金属离子、氨基酸和ｐＨ等外部因素对其发光性质的影响，并将其应 用于细胞和果蝇脑组织共聚焦荧光成像中。化合物ＮＨＰ的结构与合成路