不同桑黄生物特征的比较及咖啡酸烷基酯的抑菌作用.pdf

摘 要 桑黄，具有很高药理活性和药用价值的非常珍贵的中国传统中药，是目前为 止发现的生物抗癌作用有效率最高的真菌。组织分离法分离野生桑黄菌株 CA， 扩大了桑黄的种质资源。桑黄提取咖啡酸及咖啡酸甲酯合成的咖啡酸酯类有较好 的抑菌活性。 本文通过组织分离法从野生桑黄子实体分离菌种，与收集到的不同来源的桑 黄菌种进行形态学比较；通过不同来源的桑黄间的拮抗作用，探讨桑黄间亲缘关 系的远近。采用PCR 技术对不同来源的桑黄进行分子鉴定，韩国桑黄、金寨桑黄、 盛唐桑黄和唐桑桑黄属于P. baumii 种属；淳安桑黄和华中桑黄属于P. linteus 种 属。通过ITS 序列分析并构建进化树，进行遗传分析。金寨桑黄、韩国桑黄和盛 唐桑黄具有比较近的亲缘关系，淳安桑黄和华中桑黄亲缘关系较近，唐桑桑黄亲 缘关系距离较远。 通过对桑黄菌液体培养条件的优化，对桑黄菌培养基的活性成分的有效利 用，获得更多的桑黄菌丝体。以桑黄菌丝体干重为指标，对桑黄发酵培养基的优 化和发酵条件进行了优化，得到最优培养基的条件是：葡萄糖为碳源，大豆蛋白 胨为氮源；最优培养条件是：pH 是6，温度是30 °C，转速是140 r/min，接种量 是4 % 。桑黄含有的药理活性物质以多糖为主，对人体疾病的预防和保健有着显 著的作用。以桑黄的多糖得率为指标，利用超声波复合酶法对桑黄多糖的提取条 件进行优化，得到桑黄多糖最优的提取方式是：添加纤维素酶 3%，木瓜蛋白酶 2%和果胶酶为1.5%，料液比1:50，50 °C 的温度超声45 min 。多糖提取率最高为 10.867%。将不同来源的桑黄多糖通过红外扫描，建立红外指纹图谱分析，进行 桑黄多糖的鉴别。 本文测定桑黄多糖对ABTS 和 DPPH 的清除能力，对不同来源的桑黄多糖的 抗氧化能力的强弱进行比较，比较不同来源的桑黄多糖对ABTS 和 DPPH 自由基 清除能力的差异。根据ABTS 的IC50 值，各桑黄多糖自由基清除能力从高到低依 次为：韩国多糖＞金寨多糖＞唐桑多糖＞华中多糖＞淳安多糖＞盛唐多糖；根据 DPPH 的IC50 值，各多糖自由基清除能力从高到低依次为：金寨多糖＞华中多糖 ＞唐桑多糖＞淳安多糖＞盛唐多糖＞韩国多糖。除韩国桑黄多糖外，其他桑黄多 糖对水溶性自由基(ABTS)的清除能力明显比脂溶性自由基(DPPH)好。 III 万方数据 探讨桑黄多糖及桑黄的甲醇、乙酸乙酯、正丁醇和石油醚提取物对病原菌抑 制作用，提高桑黄的利用率。从桑黄的乙酸乙酯提取物中提取的咖啡酸，将咖啡 酸经生物转化或合成的咖啡酸烷基酯。琼脂平板扩散法检测对青枯菌，桑丁香假 单胞菌，大肠杆菌，苏云金芽胞杆菌，枯草芽孢杆菌，四联球菌和桑黄的抑制活 性。结果显示，咖啡酸甲酯，咖啡酸乙酯，咖啡酸丙酯和咖啡酸异丙酯对各菌株 几乎无抑制作用；咖啡酸丁酯、咖啡酸戊酯、咖啡酸异戊酯、咖啡酸己酯和咖啡 酸苯乙酯对实验菌株具有较强的抑制作用；咖啡酸烷基酯对桑黄都有一定的抑制 作用。分光光度法检测有抑制作用的咖啡酸烷基酯对各菌株的抑制率。咖啡酸烷 基酯对菌株的MIC50 和MIC90 通过SPSS 分析获得。结果表明咖啡酸烷基酯对实验 的革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌和真菌具有较强的抑制作用。因此，咖啡酸烷基 酯是一种新颖的有潜力的替代传统化学杀菌剂的广谱抑菌剂。 关键词 桑黄；优化；桑黄多糖；抗氧化；咖啡酸烷基酯；抑菌 IV 万方数据 Abstract Phellinus