人APOEε2APOEε4等位基因的克隆及其真核-第三军医大学学报.DOCVIP

人APOEε2及ε4等位基因修饰的神经干细胞建立 江涌1,2 吴海涛2 孙晓川2?基金项目：国家自然科学基金资助项目，重庆市卫生局重点科研课题资助项目（05-1-017），四川省教育厅青年基金项目（08zb049）supported by the National Natural Science Foundation of China , Key Program of Chongqing Health Bureau (05-1-107) and ?基金项目：国家自然科学基金资助项目，重庆市卫生局重点科研课题资助项目（05-1-017），四川省教育厅青年基金项目（08zb049） supported by the National Natural Science Foundation of China , Key Program of Chongqing Health Bureau (05-1-107) and Scientific Research Fund for the Youth of Sichuan Education Commission (08zb049). 作者简介：江涌 （1976— ）男，博士，主治医师，研究方向：颅脑损伤，已发表SCI论著3篇，SCIE综述1篇；CSCD论著3篇，CSCD综述2篇。现泸州医学院附属第一医院神经外科，泸州 646000。电话E-mail: jiangy0122@ 通讯作者：孙晓川 sunxch1445@ 电话1泸州医学院附属第一医院神经外科， 泸州，646000 2重庆医科大学附属第一医院神经外科，重庆，400016 摘要：目的 在前期已获得的人APOE ε3真核表达载体基础上，构建APOE ε2和APOE ε4的真核表达载体，转染APOE敲除鼠神经干细胞，分别建立稳定转染APOE ε2和ε4各亚型的神经干细胞系。方法 以前期克隆得到的APOE ε3 cDNA为基础，通过定点突变技术得到APOE ε2 和APOE ε4 cDNA，亚克隆入表达载体pEGFP-N1，构建pEGFP-N1-APOEε2 及pEGFP-N1-APOEε4的真核表达载体，经双酶切和测序确定序列及阅读框正确。以脂质体转染法转染APOE敲除鼠神经干细胞，通过G418筛选，建立稳定转染APOEε2和ε4各亚型的神经干细胞系。采用RT-PCR、Western blot及免疫荧光法检测APOE的表达。结果 成功构建了pEGFP-N1-APOEε2 及pEGFP-N1-APOEε4真核表达载体，并建立了稳定转染APOE ε2和ε4各亚型的神经干细胞系，成功地表达目的基因。结论 人APOEε2及ε4等位基因修饰的神经干细胞APOE 各等位基因真核表达载体的构建和稳定转染的神经干细胞系的成功建立为进一步研究其影响脑损伤病情变化及其预后的分子机制奠定了良好的实验基础。 关键词：载脂蛋白E；等位基因；真核表达载体；神经干细胞；基因表达 中图法分类号：R74；Q75 文献标识码：A Establishment of human APOE ε2 and ε4 gene modified neural stem cells JIANG Yong1,2, WU Hai-tao2, SUN Xiao-chuan2, CHEN Li-gang1, GUI Li1, GUO Zhong-duo2, GU Ying-jiang1, LIU Luo-tong1 1 Department of Neurosurgery, the First Affiliated Hospital of Luzhou Medical College, Luzhou 646000, China 2 Department of Neurosurgery, the First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University, Chongqing 400016, China Abstract Objective To construct eukaryotic expression vector of APOEε2 and APOEε4 and establish APOE subtype gene modified neural stem cells (NSCs) based on the clone of human APOE ε3 gene. Methods The APOE ε3 cDNA has been cloned in our