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流式细胞术在临床血液学 流式细胞术在临床血液学与医学科研中的应用 陈军浩 南京人学医学院附属南京鼓楼医院 流式细胞仪基本工作原理 光路系 统 液路系统 电路系统 流式细胞仪光路图外周血FSC-SSC点图荧光信号 (FL1、FL2、FL3)滤光片红系成熟过程抗原表达B系成熟过程抗原表达T 系成熟过程抗原表达粒系成熟过程抗原表达单系成熟过程抗原表达急性白血 病免疫分型髓系标志：CD13、CD33、CD14、CD117、CD61、胞浆MPO。B系标志： CD19、CD10、CD22、CD20、胞浆 CD22。T 系标志：CD5、CD7、胞浆 CD3。红系 标志：CD71、Gly A非系列标志：CD34、HLA-DR白血病细胞系列不保真性抗原 跨系表达抗原表达不同步抗原表达过高、过低表达异常蛋口 K0RSA3544 CD66c CD19白血病细胞伴CD33表达 细胞抗原表达过高、过低AML-M0/M1有低的SSC 和FSC。在CD45-SSC图上出现在原始细胞位置上，至少表达一个特异性标志如 CD13或CD33,但MPO比CD13与CD33更灵敏。也可表达CD7或CD4。HLA-DR、 CD34阳性，有些研究表明CD7与CD34共表达在AML且预后差。流式上Ml与M0 相似不易区分，Ml —般CD13+、CD33+,但CD34表达可少于M0,可能表达部 分CD150 AML-M2 M2与Ml的主要区别是成熟度增加，原始细胞减少，CD15表 达较Ml显著，CD34弱于Ml。CD45-SSC图显示从髓系blast区至成熟骨髓细胞 区的连续细胞带，CD45-SSC图有助于确定blasts比例。AML-M3高颗粒性， 表现为较高的SSC,多数情况HLA-DR阴性或表达很少，CD34少于M2、一般CD13 弱于CD33,大多表达CD117o M3v低颗粒性，表现为较低的SSC。AML-M4/M5两 型表型相似，但M4较M5表达更多的CD34 ( + ), CD45-SSC图上，不成熟细胞出 现在单核区，重要的表型为CD13、CD33、HLA-DRCD14和CD15, CD33可表达强 于 CD13o AML-M6 特征不明显,HLA-DR, CD34、CD13、CD33、CD19、CD22、CD5、CD7 等 均阴性，CD45-SSC图显示主要为CD45阴性区域为红系成份，高表达CD71。 AML-M7巨核细胞白血病，在AML中少于1%。一般CD61 （GpIIIa）和/或CD41 （GpIIb-IIIa）阳性，特别而注意由于血小板粘附在blasts上造成的假阳性， B-ALL B-ALL淋巴细胞增生性疾病 浆细胞白血病 浆细胞白血病T-细胞白血病 T-细胞口血病胞浆CD3阳性 慢性淋巴细胞口血病 套细胞淋巴瘤 边缘带B细胞 淋巴瘤 吞噬、加工、递呈抗原 细胞吞噬功能检测DEX （ Dextrans,右旋糖昔）。 37°C, DEX-F1TC与活细胞共孵育lOmin。洗去细胞外多余的DEX-FITC。流式 细胞仪检测FL1荧光强度的变化。细胞吞噬功能检测细胞吞噬功能检测的意 义单核吞噬细胞系统是机体的最初防御系统，有清除或吞噬异物的能力。本试 验可评价此系统的功能。癌症患者细胞吞噬功能减低。研究免疫抑制药物对细 胞的作用。呼吸爆发中性粒细胞呼吸爆发肝素抗凝血。调理后的细菌为刺激 剂；PMA为强刺激剂；fMLP为弱刺激剂。37°C,刺激后细胞与二氢罗丹明（DHR） 123孵育。流式细胞仪检测FL1荧光强度。中性粒细胞呼吸爆发 呼吸爆发的 意义慢性肉芽肿症（chronicgranulomatoiis disease, CGD），患者的中性粒细胞 和单核细胞吞噬细菌后不能产后呼吸爆发，不能杀灭摄入的致病菌。超氧阴离 子可造成正常组织损伤。如类风湿关节炎。APC与T细胞的作用 移植前后CD3 阳性T细胞CD4/CD8细胞的表达 移植前后CD3阳性T细胞CD8/CD28的表达 移 植前后CD4阳性细胞CD45RA/CD45R0的表达 人淋巴细胞CD154的表达Th 1/Th2细胞检测（三色法）Thl/Th2细胞检测（四色法）特异性抗原激活淋巴 细胞 移植后免疫检测CD25较基础值高出10%,表明即将或已经发生排斥。 HLA-DR增加10%,且不伴有CD25增加，提示巨细胞病毒感染。CD4/CD8小于0. 2 必须停用免疫抑制剂。流式细胞术CBA MHC I四聚体模式图每条MHC接有一个 生物素链亲和素结合四个生物素微球蛋白维持MHC正确构象肽提供特异性结 合 四聚体较单体与CTL结合稳定 Basic Pentamer Staining Protocol MHC I 四聚体技术的意义四聚体复合物法具有精确的肽特异性。阳性细胞数量与CTL 功能密切相关。分