课件:白血病细胞遗传学陈新科.ppt

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后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 资料仅供参考,实际情况实际分析 * * 一、白血病的细胞遗传学发展简史 虽然早在1914年德国学者Boveri就提出了染色体畸变是导致肿瘤的基本原因的假说,可是由于受到技术的限制,长时间以来人类染色体的正确数目一直无法搞清楚,自然更谈不上对肿瘤开展研究了。1956年Tjio和Levan通过人胚胎肺的成纤维细胞培养,终于确定人类染色体的正确数目为46.这一重要发现被公认为细胞遗传学发展史上的第一个里程碑。1958年Ford等在一例急性白血病患者的骨髓细胞中发现有44个染色体和1个断片的非整倍体异常,标志着白血病染色体研究的开始。1960年Nowell和 Hungerford在美国费城发现了2例慢性粒细胞白血病患者外周血标本中有小的异常染色体,这一发现迅速为许多其他学者所证实并将该异常染色体命名为Ph染色体,即费城染色体。这是人类肿瘤中第一个被发现的标记染色体,它激起了人们对肿瘤染色体研究的巨大热情,遂被公认为细胞遗传学发展史上的第二个里程碑。 白血病的染色体研究大致经历了以下4个发展阶段: 1、非显带时期(1958-1970年) 2、显带时期(1970年后) 3、FISH时期(1980年后) 4、多色FISH时期(1990年后) 二、白血病的细胞遗传学研究的方法 (一)标本的来源和采集 按照肿瘤染色体研究的标本必须取自肿瘤组织本身的原则,白血病的染色体研究通常以采用骨髓为宜。当外周血白细胞总数10x109/L和原、幼细胞百分比10%时,也可采用外周血细胞进行短期培养。 (二)染色体的制备 1、标本采集。用肝素润湿的针筒抽取骨髓2ml或更多,立即注入含1640培养基的标本瓶中。 2、细胞接种。将标本瓶带回实验室后,先做骨髓有核细胞计数,再按照1~2x106/ml的细胞密度注入标本瓶中,将培养瓶放入37℃温箱中持续培养24或48h,其间定时摇匀培养物。 3、阻留中期分裂相。培养瓶中加入秋水仙素,终浓度为0.05ug/ml,摇匀后置37℃温箱中1h。 4、收获细胞。将培养物吸至尖底离心管,离心,1000转/min,10min。 5、低渗。弃上清液,沿管壁缓缓加入预温至37℃的0.075mol/L的KCl溶液6~8ml,吹打混匀后置37℃温箱中30min。 6、预固定。加入3:1甲醇、冰醋酸固定液1ml,吹打混匀。离心,1000转/min,10min。 7、固定。吸去上清液,加新鲜配制的3:1甲醇、冰醋酸固定液6~8ml,吹打混匀。静置至少30min后,离心,1000转/min,10min。重复固定三次,后两次静置时间至少15min。 8、制片。用吸管将细胞悬液轻轻打匀后吸取少量,从10cm高处滴至冰水浸泡过的玻片上,每片三滴,然后在酒精灯上来回通过数次,使其干燥。 9、显带。将玻片置于预温至87.5℃的 R显带液中孵育,时间以60~120min为宜。 10、染色。标本用10%的Giemsa染色液染色10~20min,流水冲洗,待干,镜检。 采集标本 短期培养 加秋水仙素1h 低渗30min 预固定 固定 制片 显带 染色 三、白血病染色体畸变的临床和生物学意义 (一)克隆性染色体异常的检出有助于白血病的诊断和鉴别诊断 特别是一些特异性染色体的重排不仅有助于AML和ALL的鉴别,而且有助于进一步识别它们中的亚型。1985年国际白血病形态学、免疫学和细胞遗传学分

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