专题2课题1微生物的实验室培养 二内容资料.pptVIP

2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方 不管哪种培养基，一般都含有水、无机盐、碳源和氮源等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求． 3.培养基的成分 血清中含有： ①多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等） ②多种金属离子； ③激素； ④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。 ⑤各种生长因子 ⑥转移蛋白 ⑦不明成分 人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。 （四）无菌技术 1.无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 成功地培养微生物的关键。 耐高温需保持干燥的 物品，160～170℃ 1～2小时 接种环、接种针等 金属用具 70~75℃、30min 80℃、15min 100℃、5~6min 消毒 灭菌 定义 方法 较为温和理化方法， 杀死部分有害菌体 （不包括芽孢、孢子） 强烈的理化方法， 杀死所有微生物 （包括芽孢、孢子） 煮沸消毒法 巴氏消毒法 化学药剂 紫外线 灼烧灭菌 干热灭菌 酒精、氯气、石炭酸等 高压蒸汽灭菌 培养基， 100KPa、 121℃、15～30min 二.无菌技术： 防止外来杂菌的污染 2.消毒与灭菌： 高压蒸气灭菌的原理是（ ） A．高压使细菌DNA变性 B．高压使细菌蛋白质凝固变性 C．高温烫死细菌 D．高温使细菌DNA变性 B 关于灭菌和消毒的不正确的理解是 A．消毒和灭菌实质上是相同的 B．灭菌是指杀死环境中的一切微生物 的细胞、芽孢和孢子 C．接种环用烧灼的方法灭菌 D．常用灭菌方法有加热法、过滤法、红外线法、化学药品法 A 1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手 答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。 2.无菌范围： 实验操作空间消毒 操作者的手、衣着消毒 实验用具灭菌 实验操作过程 二.无菌技术： 防止外来杂菌的污染 1.消毒与灭菌： 酒精灯旁操作 超净工作台 二、微生物实验室培养的基本操作程序 1、器具的灭菌 2、培养基的配制 3、培养基的灭菌 4、倒平板 5、微生物接种 6、恒温箱中培养 7、菌种的保存 涂布器 接种环 接种针 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方 H2O 定容至1000ml Nacl 5g 蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 琼脂20.0g 四.大肠杆菌的纯化培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1.计算： 培养基用量 依配方计算各成分的用量 2.称量： 3.溶化： 牛肉膏黏稠，用称量纸称取 牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖 牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解 →取纸 →蛋白胨、NaCl →琼脂 →补水定容 4.调pH、分装、封口： 5.灭菌： 6.倒平板 7.无菌检查： 37℃培养24-48h 培养基、培养皿 分散成单个细胞, 形成单个菌落 倒平板 约50℃ 防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染 灼烧灭菌， 防止瓶口的微生物污染培养基 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 问题讨论 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 到目前为止， 几十项Nobel生理学和医学奖，化学奖 都与微生物学有关 1.细菌的形态 拟核，大型环状DNA 质粒(小型环状DNA，含抗生素等抗药性和固氮的基因) 其成分为肽聚糖 2.细菌的结构 特殊结构（有时包括芽孢） 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。（抗逆性极强） 注：不是繁殖体 例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌. 细菌主要是以二分裂的方式进行增殖（如右图） 3.细菌