二恶英类化学物质毒性机理(中国科学院上海高等研究院分析测试中心).docVIP

二恶英类化学物质的毒性机理 （中国科学院上海高等研究院分析测试中心） 高工-　　二恶英类化学物质毒性的分子机制还没完全研究清楚，但经过二十多年的研究人们对其机理也有了一定的认识。总的说来二恶英类化学物质产生作用并不是通过直接的损伤，二恶英类化学物质并不与蛋白质和核酸形成加合物，也不直接损害细胞DNA。它们的作用主要是通过芳香烃受体诱导基因表达，改变激酶活性，改变蛋白质功能等而起作用。现分别叙述如下。　　一.芳香烃受体介导的基因表达　　通过芳香烃受体介导基因表达（如P4501A1）是二恶英类化学物质毒性作用最主要也是最基本的作用机制。芳香烃受体是一高分子量的蛋白质（110-150KD），与二恶英类化学物质有可逆转的高亲和力，主要存在于细胞浆中（也有小部分在胞核中），其作用模式类似于甾体类受体，但也有不同。该蛋白属于basic helix-loop-helix PAS(Per-Arnt-Stim)超家族，该家族均为转录因子)，均含有两个功能部位即：basic helix-loop-helix部位和PAS功能部位，该族蛋白对激活基因的转录具有重要意义。且各芳香烃受体具有明显的种间，种内和组织差异。芳香烃受体在细胞浆中是以380 KD的复合物无活性的形式存在，除自身外还有3-4种蛋白质与之结合，其中只鉴别出了90 KD的热休克蛋白（heat shock protein, HSP90），该蛋白对受体的活性具有重要影响。　　芳香烃受体介导的基因表达基本的作用过程可区分以下几个基本过程1.二恶英类化学物进入细胞；2.化合物与芳香烃受体结合；3.配体-受体复合物与DNA识别位点结合；4.特异基因的转录及翻译；5.表达蛋白发挥作用。在这五个过程中，1-3步研究的比较清楚，而4-5步目前还不很清楚．　　1. 二恶英类化学物质进入细胞：通常认为二恶英类化学物质通过被动扩散方式进入细胞浆（由于二恶英类化学物质都为脂溶性物质），但也有几个研究显示被动扩散并不能完全解释二恶英类化学物质的毒性反应。如：该类物质可刺激肝细胞的生长和脂肪的浸润，上皮细胞的肥大增生，这些观察表明细胞膜在二恶英类化学物质的毒性作用中起着一定作用。　　2. 二恶英类化学物质与芳香烃受体的结合：二恶英类化学物质进入胞浆后即与胞浆中的芳香烃受体结合，该结合过程将导致芳香烃受体激活。但该结合导致的物理化学变化目前并不清楚。Miller等的实验显示配体-芳香烃复合物的形成并不能与DNA结合位点结合，不足以导致生物反应，说明受体的激活是一个多步骤的过程。体外研究中温度对芳香烃受体的激活有重要作用，于4℃形成的复合物并不能正确与基因位点结合，而在高于在20℃形成的复合物则有生物活性，说明该过程需要温度依赖性的激活步骤。HSP90对受体的激活起着重要作用，HSP90对于配体的结合是必须的，并且可以抑制未与配体结合的受体与DNA结合（设想为抑制受体与核中的转录因子结合）。当配体与受体结合，原结合于受体的HSP90即脱落下来，暴露出受体的DNA结合位点，导致受体的激活。　　3. 配体-受体复合物与DNA的结合：二恶英类化学物质与芳香烃受体的结合使芳香受体激活，随后配体-受体复合物即转移入胞，在细胞核中聚集。该复合物在与DNA结合以前必须与细胞核中的一种蛋白结合即芳香烃受体核转位子蛋白（Ah receptor nuclear translocator protein, ARNT）结合，才能获得与DNA结合的能力。该蛋白质分子量为87kDa，也属于basic helix-loop-helix PAS(Per-Arnt-Stim)超家族，含有两个功能部位即：basic helix-loop-helix（bHLH）部位和PAS功能部位。它与同属一个家族的芳香烃受体结合形成异二聚体，对于与DNA的结合意义重大。仅保留芳香烃受体核转位子蛋白的bHLH和PAS部位，可保存ARNT形成二聚体及与DNA结合的能力，其中bHLH部位的两个α-helilx结构主要参与二聚体的形成，而basic结构则仅与DNA的结合有关；PAS部位包括两个亚结构即PAS A和PAS B，去除两者之一，仅轻微影响异二聚体形成能力，但两者均去除则严重影响异二聚体形成能力。AhR/ ARNT复合物然后与特异基因上游部位的增强子即二恶英反应元件（dioxin responsive element, XRE）结合即可激活基因的转录。二恶英/外来物反应元件的核心序列为5′-T/GNGCGTGA/CG/CA-3′。　　4. 特定基因的转录和翻译：二恶英类化学物质激活的基因表达包括细胞色素P4501A1和1A2，谷胱甘肽S转移酶，甲基醌氧化还原酶，醛脱羟酶等。其中最主要的是细胞色素P4501A1和