第五章--生物质谱仪器与技术.ppt

三、毛细管电泳-质谱联用技术（CE-MS ） 毛细管电泳-质谱联用技术 一种基于样品各组份间淌度和分配行为差异而实现分离的电泳新技术与单一样本离子组份的质荷比不同的质谱检测技术的联用。 CE-MS的应用 蛋白质组学、化学药物研究、医学检验以及法医学等领域。 CE-MS系统组成 毛细管电泳仪、接口装置、质谱仪和计算机系统。 区带毛细管电泳（CZE）最常用 ESl是CE-MS首选的离子源 CE/ESI-MS接口类型 同轴液体鞘流、无鞘接口、液体连接。 质量分析器 最常见的是四级杆质量分析器 三、毛细管电泳-质谱联用技术（CE-MS ） 四、串联质谱技术 空间串联质谱技术（space tandem mass spectrometry） 为了得到更多的有关分子离子和碎片离子的结构信息，采用两个或以上的质量分析器与碰撞活化室串联使用。如Q-TOF、TOF-TOF、Q-Q-Q等，实现多级（n）质谱，常表示为MSn。 二级串联（MS-MS，MS/MS）的两个分析器之间有一个碰撞活化室，目的是将前一级质谱仪（MS1）选定的前体离子打碎，由后一级质谱仪（MS2）分析。 时间串联质谱技术（time tandem mass spectrometry） 只有一个质量分析器，前一时刻选定离子，在分析器内打碎，后一时刻再进行分析。如IT-MS、FT-MS。 前体离子的裂解方式： 碰撞诱导断裂（CID）、亚稳裂解、表面诱导解离、激光诱导解离。 串联质谱技术的数据获取方式： 产物离子扫描、前体离子扫描、中性丢失扫描及选择反应检测。 四、串联质谱技术 串联质谱技术特点 当使用GC-MS、LC-MS时，若色谱仪未能将化合物完全分离，串联质谱技术可以通过选择性测定某组分的特征性前体离子，获取该组分的结构和量的信息，而不会受到共存组分的干扰。 GC-MS/MS、LC-MS/MS均可降低对样品处理的选择性要求，测定快速、节省材料。 四、串联质谱技术 串联质谱技术特点 在未知化合物的结构解析、复杂混合物中待测化合物的鉴定、碎片裂解途径的阐明以及低浓度生物样品的定量分析方面具有很大优势。 采用产物离子扫描可用于7肽和蛋白质碎片的氨基酸序列检测。 采用中性丢失扫描可用于寻找具有相同结构特征的药物代谢物分子。 采用选择反应离子检测可消除生物基质对低浓度待测化合物定量分析的干扰，从而实现对待测物特别是血药浓度的高特异、高灵敏分析。 四、串联质谱技术 第三节 质谱仪在生物医学领域的应用 生物质谱技术 生物样品离子化的质谱技术，以ESI和MALDI等为代表的质谱技术。 临床应用 生物标志物检测（小分子、大分子） 微生物鉴定 治疗药物监测(TDM) 第三节　质谱仪在生物医学领域的应用 本章小结 1. 质谱仪作用与组成：将分析物气化形成离子后按质荷比(m/z)分开而进行定性、定量和结构分析，主要由真空系统、进样系统、离子源、加速器、质量分析器、检测器及计算机系统所组成，其核心是离子源和质量分析器。 2. 离子源常见的电离方式：使气化样品中的原子、分子或分子碎片电离成正离子。常见的电离方式有电子电离（EI）、化学电离（CI）、场电离（FI）、场解吸（FD）、快原子轰击（FAB）、电喷雾电离（ESI）、大气压化学电离（APCI）、基质辅助激光解吸电离（MALDI）和电喷雾解吸电离(DESI)等。其中，EI属于硬电离，其他都属于软电离。软电离方式易得到准分子离子峰，硬电离方式一般只能得到碎片离子。 本章小结 3.质量分析器：只用磁场的单聚焦分析器，既用电场又用磁场的双聚焦分析器、傅立叶变换离子回旋共振分析器，只用电场的四极杆分析器、离子阱分析器，既不用电场也不用磁场的飞行时间分析器。 4.五种质谱仪：磁质谱仪（单聚焦与双聚焦质谱仪）、四极杆质谱仪（Q-MS）、离子阱质谱仪（IT-MS）、飞行时间质谱仪（TOF-MS）和傅立叶变换质谱仪（FT-MS）。 5.质谱仪的主要性能指标是分辨率、灵敏度、质量范围、质量稳定性和质量精度等。其定义与常见的临床检验仪器性能指标有所不同，要注意区别。 本章小结 6.质谱联用技术如GC-MS、LC-MS、CE-MS ，先将有机混合物分离成纯组分后再进入质谱仪分析，充分发挥色谱仪分离特长与质谱仪的定性鉴定特长，使分离和鉴定同时进行。还用空间串联质谱仪如Q-TOF、TOF-TOF、Q-Q-Q等，质量分析器之间有碰撞活化室，可以得到更多的分子离子和碎片离子的结构信息。 7.生物质谱是指对生物样品以ESI和MALDI等离子化为代表的的质谱。生物质谱在生物标志物检测、微生物鉴定和治疗药物监测等检验医学领域的应用日益广泛。其中，同位素稀释－质谱法(ID-MS)是测定无机离子、单糖类、脂类、小分子含氮化合物等小分子生物标志物的决定性方法，其