归芪聪志汤干预血管性痴呆模型大鼠及脑组织氧化损伤、内质网应激的研究-方剂学专业论文.docxVIP

归芪聪志汤抗 归芪聪志汤抗 VD 模型大鼠脑组织氧化损伤及内质网应激的实验研究 PAGE PAGE 10 摘 要 目的：通过观察归芪聪志汤对血管性痴呆（VD）模型大鼠学习记忆能力、海马组 织病理、脑皮质氧化损伤相关酶以及海马内质网应激标志性分子的影响，探讨该方治疗 血管性痴呆的药效及其作用机理。 方法：雄性 wistar 大鼠 80 只（体重 280±10g），按随机数字表选 10 只大鼠作为假手 术组，其余大鼠采用反复夹闭颈总动脉加注射硝普钠降压联合永久结扎单侧颈总动脉法 制备 VD 模型；按随机数字表分为模型组、阳性对照组（脑复康）、归芪聪志汤高、中、 低组。药物干预治疗 28 天后进行 Morris 水迷宫行为学检测，通过定位航行及空间搜索 实验检测大鼠学习记忆能力；处死大鼠，取各组大鼠脑皮质及海马组织进行指标检测， HE 染色观察各组大鼠海马组织病理改变；生物化学法检测各组大鼠脑皮质匀浆液氧化 损伤相关酶 SOD、GSH-Px、MDA 含量；RT-qPCR 和 Western blot 分别检测各组大鼠之 间内质网应激相关分子 HSP70、HSP27、GRP78、GRP94、CHOP、XBP1mRNA 和蛋白 的表达量变化。 结果： （1）Morris 水迷宫行为学检测：与假手术组相比，模型组大鼠逃逸潜伏期明显增长， 穿越平台次数明显减少（P﹤0.05）；与模型组相比，各药物干预组大鼠逃逸潜伏期显著 缩短，穿越平台次数显著增加（P﹤0.05）；其中归芪聪志汤中剂量组明显优于阳性对照 组（P﹤0.05）。 （2）海马组织病理观察：与假手术组相比，模型组海马组织神经细胞损伤加重；与 模型组相比，各药物干预组海马神经细胞损伤程度均减轻；与阳性对照组相比，其中归 芪聪志汤中、高剂量组海马组织神经细胞损伤程度明显轻于阳性对照组。 （3）氧化损伤相关酶检测：与假手术组相比，模型组大鼠 SOD 和 GSH-Px 明显降 低，MDA 明显升高（P﹤0.05）；与模型组相比，各药物干预组 SOD 和 GSH-Px 显著 升高，MDA 显著降低（P﹤0.05）；其中归芪聪志汤中剂量组明显优于阳性对照组（P﹤ 0.05）。 （4）内质网应激相关分子 mRNA 检测：与假手术组相比，模型组大鼠海马组织 HSP70、HSP27、GRP78、GRP94、CHOP、XBP1 基因表达显著上调（P＜0.05）；与模 型组相比，除归芪聪志汤低剂量组，各药物干预组 HSP70、HSP27、GRP78、GRP94、 CHOP、XBP1 基因表达显著下调（P＜0.05)；与阳性对照组相比，HSP27 中剂量组显著 下调（P＜0.05)，归芪聪志汤各剂量组的其它五个基因无显著变化。 （5）内质网应激相关分子蛋白检测：与假手术组相比，模型组大鼠海马组织 GRP78、 GRP94、CHOP、XBP1 蛋白表达显著上调（P＜0.05）；与模型组相比，除归芪聪志汤低 剂量组，各药物干预组四个蛋白表达显著下调（P＜0.05）；与阳性对照组相比，归芪聪 志汤中剂量组四个蛋白显著下调（P＜0.05）。 结论：反复夹闭颈总动脉加注射硝普钠降压联合永久性结扎单侧颈总动脉法可以较 好的复制 VD 大鼠模型，模型可靠。归芪聪志汤能够显著改善 VD 模型大鼠的学习记忆 能力，减轻海马神经细胞损伤，且以中剂量效果最为显著。其机理与降低 VD 大鼠神经 细胞氧化损伤及减轻内质网应激反应有关。 关键词：血管性痴呆；归芪聪志汤；内质网应激；氧化损伤 ABSTRACT Objective This study was designed to observe the effects of Guiqicongzhi decoction on rats study the behavioral alteration, anti-oxidative stress enzymes and endoplasmic reticulum stress molecular markers of hippocampus in rats with vascular dementia(VD) model, and thereby, to study the pharmological actions of Guiqicongzhi decoction when treating VD and to discuss revelant mechanisms. Methods Wistar rats (n=80,♂, body weighted as 280±10g）) were choosed to enter this study, 10 rats were assigned into sham group w