海人藻酸诱导的癫痫持续状态大鼠神经元损伤机制的实验分析-神经病学专业论文.docxVIP

山东丈学硕士学位论文海人藻酸诱导的癫痫持续状态大鼠神经元 山东丈学硕士学位论文 海人藻酸诱导的癫痫持续状态大鼠神经元 损伤机制的实验研究 研究生孙建英 导师迟兆富教授 中文摘要 目的 精确观察海人藻酸诱导的癫瘸持续状态所致神经元损伤的形 态学改变，并同时观测细胞凋亡相关的DNA碎片标志物，以探讨此癫 痫模型中神经元损伤的机制。 方法选用成年雄性Wistar鼠，用海人藻酸(KA)诱发癫痫持续状态 (SE)3小时，然后于第24小时和第72小时两个时点将动物处死。分组 中的一组鼠用于制作脑切片，用苏木精、伊红和dUTP切口末端标记的 末端脱氧核苷转移酶(TUNEL)技术染色，分别用光镜和电镜观察。另外 各组根据第一组电镜观察的结果分别从相同的脑区提取DNA，提取的 DNA在含有溴已锭的琼脂凝胶上电泳，来检测有无核内DNA的裂解(核 内DNA裂解后会出现特征性的梯状DNA电泳带)。注射了生理盐水的 成年雄性鼠被用作阴性对照。 ／、 ＼(’结果用KA诱导的sE模型，在第24小时和第72小时两个时点 、 将动物处死，均发现在海马、杏仁核、梨状区、内嗅区和额叶皮层出现 神经元形态学上的坏死，在这些脑区癫痫状态后第24小时和第72小时 山东人学硕士学位论文两个时点都出现梯状DNA电泳带，以及癫痫状态后第72小时有些脑区 山东人学硕士学位论文 两个时点都出现梯状DNA电泳带，以及癫痫状态后第72小时有些脑区 出现TUNEL阳性染色。从超微结构上看，坏死神经元表现为细胞变暗、 皱缩 生理 结论我们的研究结果表明，在这些坏死而非典型凋亡的神经元中 促进程序性细胞死亡的机制被sE激活，从而存在这种机制导致SE诱导 的神经元坏死的可能性。由于此模型是由NMDA(N一甲基．D一天冬氨酸) 受体介导的，故内源性谷氨酸的释放与此癫痫模型的神经元损伤有关。 山东大学硕士学位论文EXPERIMENTAL 山东大学硕士学位论文 EXPERIMENTAL STUDY OF THE MECHANISM OF NEURoNAL DEATH INDUCED BY STATUS EPILEPTlCUS Postgraduate：Jianying Sun Mentor：Prof．Zhaofu Chi Abstract objeetives：To determine definitively the morphology of neuronal death from kainic acid(KA)一induced status epilepticus(SE)，and to correlate this with markers of DNA fragmentation that have been associated with cellular apoptosis．And detect the mechenism of neurol necrosis． Methods： SE was induced for 3 hours in adult male Wistar rats with KA．24 or 72 hours later the rats were killed．One group of rats had brain sections stained with hematoxylin and eosin and terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nic—end labeling(TUNEL)technique，then examined by light microscopy and by electron microscopy in the first group．The extracted DNA Was electrophoresed on an agarose gel with ethidium bromide and examined for the presence or absence of internucleosomal DNA cleavage (DNA laddering)．The sam．e rats injected with saline were used as negative controls． 山东火学硕+学位论文Results：Twenty—four 山东火学硕+学位论文 Results：Twenty—four and seventy—two hours after 3 hours of KA— induced SE，neuronal death in the hippocampus，amygdala，and piriform， entorhinal，and fronal c