海岛棉遗传转化体系及转NAC6基因的研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

本文是国家自然科学基金项目 鹰嘴豆 CarNAC 基因转棉花抗旱育种价值的评价 （项目编号 海岛棉高效转化体系建立及转 SATI 基因抗蚜棉的研 究（项目编号的部分或阶段性研究成果 课题主持人：陈全家 （新疆农业大学） I I 海岛棉遗传转化体系及转 NAC6 基因的研究 摘 要 本研究通过诱导不同基因型海岛棉下胚轴的体细胞胚胎发生，以新海 16 号、新海 24 号、新海 30 号胚性愈伤组织为受体材料，进一步优化海岛棉遗传 转化体系，通过农杆菌介导法转化 NAC 转录子家族，获得转基因再生植株 T0 代，使用 PEG6000(简称 PEG)对棉花的体细胞胚胎进行渗透胁迫，研究体细胞 胚胎对不同浓度 PEG 胁迫的敏感性，研究内容及结果如下： 利用本实验室已经建立的棉花再生体系，同时以陆地棉为基础比较海岛棉 再生植株和非再生植株在诱导愈伤组织时期、愈伤组织分化时期、体细胞胚胎 时期的出愈数量、出愈时间，进一步确定再生植株比非再生植株在体细胞发生 方面的优越性。结果表明再生植株比非再生植株在各个时期的时间缩短了 30 d 左右。 以 3 个栽培海岛棉品种新海 30、新海 24、新海 16 诱导而来的胚性愈伤组 织为受体材料，采用方差分析的方法研究不同菌种和质粒对本实验室已建立的 农杆菌介导海岛棉外源基因转化体系的影响。研究结果表明：菌种和质粒对转 化率有极其显著的影响，而两者之间的互作关系也比较显著。最终得到农杆菌 介导转化海岛棉胚性愈伤组织的最佳菌种和质粒是:GV3101 和 pBI121。本研究 结果将有助于改进和完善海岛棉胚性愈伤组织遗传转化体系。 通过 PEG6000 胁迫胚性愈伤组织，研究不同浓度 PEG6000 胁迫下胚性愈 伤组织的诱导率，得出耐旱水平变化情况，通过测定超氧化物歧化酶（SOD）、 过氧化物酶（POD）等的活性来鉴定转基因和非转基因海岛棉的耐旱性。结果 表明：PEG6000 的浓度为 10%时，转 NAC6 基因 Xh30 的抗旱性达到最好，随 着 PEG 浓度的增加海岛棉五项生理指标活性逐渐降低，最终死亡。 关键词： 海岛棉；再生体系；NAC 转录子家族基因；菌种；PEG6000；抗旱性 II II Study on the Genetic Transformation of Sea Island Cotton and NAC6 Transcripts Family Gene Abstract In this study ,to induct different genotypes fo sea island cotton hypocotyls to somatic embryogenesis ,using the embryogenesis callus of Xinhai 16, Xinhai 24 and Xinhai 30 as acceptor materials, then further optimizing the genetic transformation system of sea island cotton, transforming NAC transcription factor family through agrobacterium-mediatde method to get transgenic regeneration plant T0, and then taking osmotic stress on cotton somatic embryogenesis with PEG6000(referred to PEG),by studying the sensitivity of somatic embryos to different concentrations of PEG stress ，the research contents and the results are as follows: Using the established cotton regeneration system, compare regeneration plants and the regenerative plants of island cotton and land cotton in induced callus period, further define the regeneration plants have advantage over regeneration plants in somatic cells happen. The results show that the regeneration plants