含砷、汞类矿物中药对小鼠肾脏有机阴离子转运体及首过效应的影响-药理学专业论文.docxVIP

广州中医药大学学位论文原创性声明本人郑重声明： 广州中医药大学学位论文原创性声明 本人郑重声明： 所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工 作所取得的成果。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均 已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名么主．监 腓衙匆彳日 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解广州中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向 国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权广州中 医药大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影 印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名 论文导师签名 日期：肪．细 lIMM|MMIIIIIIIIIY2826266 lIMM|MMIIIIIIIII Y2826266 摘 要 目的： 研究含砷、汞类矿物中药对小鼠肾脏有机阴离子转运体(Oatl，Oat3)和与首过 效应相关联的细胞色素P450(Cyp3a，Cyp2e1)、P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp) 的影响。 方法： SPF级NIH小鼠，随机分为纯水组、羧甲基纤维素钠(CMC)组、丙磺舒组(50 mg·kg’1)、雄黄组(60，15 mg·kgd)、水飞雄黄组(60，15 mg·kg’1)、朱砂组(120， 30 mg·kg’1)和氯化汞(HgCl2)组(0．2，0．05 mg·kg’1)，每组70只，雌雄各半。各 组小鼠灌胃相应的供试物，2次／d，连续5天。第六天灌胃供试物1 h后，尾静脉注射 对一氨基马尿酸(para-aminohippuric acid，PAH，30 mg‘kg-)于1．0、2．5、5．0、7．5、 10．0、20．0及30．0 rnin，分别从每组取10只小鼠安乐处死收集全血并迅速摘取肾脏。 SPF级NIH小鼠，随机分为纯水组、CMC组、利福平组(40 mg·kg’1)、酮康唑 组(24 mg·kg’1)、雄黄组(60，15 mg·kg‘1)、水飞雄黄组(60，15 mg·kg。1)、朱砂 组(120，30 mg·kg。1)和HgCh组(0．2，O．05 mg·kg’1)，每组80只，雌雄各半，灌 胃方法同上。第六天灌胃供试物1h后，再灌胃对乙酰氨基酚(acetaminophen，APAP， 20 mg·kg。1)于5、15、30、45、60、75、90、120 min，分别从每组取10只小鼠安乐 处死收集全血并迅速摘取肝脏和小肠。 用药动学软件(DAS2．O)计算血清中PAH的药动学参数，测定肾切片和肾匀浆 中PAH的含量。以红霉素法和氨基比林法测定小鼠肝／肠微粒体中Cyp3a活性，以苯 胺法测定小鼠肝微粒体中Cyp2el活性。测定小鼠血清和肝匀浆液中APAP浓度，用 DAS2．0计算血清中APAP的药动学参数，用超微量ATP酶测试盒测定肠匀浆液中P．gP 依赖性的ATP酶的活性；用Folin．酚法定量蛋白含量。用实时定量PCR(RT-．PCR)测 定小鼠肾脏Oatl、Oat3，肝脏Cyp3al l、Cyp2el及小肠Abcblb mRNA的表达。 齄里．：口木· 测定小鼠Oats!摄取活性的实验结果：与CMC对照组比较，HgCh高、低剂量组的fl∥ 显著延长(尸O．01)；雄黄、水飞雄黄、朱砂、HgCh高、低剂量组的Vd、CL和AUCo．30mi。 均发生显著变化：Vd缩小(尸0．01)、CL降低(尸0．01)、AUCo．30min增大(尸O．05， P0．01)；与CMC对照组比较，雄黄、水飞雄黄、朱砂、HgCl2的高、低剂量组肾切 片摄取的PAH的量显著降低(尸O．05，P0．01)；比较PAH‘肾脏AUCl-20min与血清 AUCj-20mi。。的比值。与CMC对照组比较，雄黄、水飞雄黄、朱砂、HgCb的高、低剂量 组AUCl．20min间的比值均显著降低(尸O．05，P0．01)。 测定肝脏、肠道微粒体实验结果：无论以红霉素还是氨基比林为底物测定Cyp3a 测定肝脏、肠道微粒体实验结果：无论以红霉素还是氨基比林为底物测定Cyp3a 酶活性，雄黄、水飞雄黄、朱砂、HgCl2的高、低剂量组的Cyp3a酶活性均显著高于 CMC组(P0．05，P0．01)。以苯胺为底物Cyp2el酶活性时，雄黄、水飞雄黄、朱 砂、HgCl2的高、低剂量组的Cyp2el酶活性均显著高于CMC组(尸0．05，P0．01)。 测定小鼠P．gp外排活性的实验结果：与CMC对照组比较，朱砂和HgCl2高剂量组 I筘Jtl／2(ab