含硒复合物对犬乳腺肿瘤细胞CTM1211的生长抑制和血管生成相关因子的调节作用-临床兽医专业论文.docxVIP

研究生优秀毕业论文 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 否 如需保密，解密时间 年 月 日 是否保密 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究 成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已 经发表或撰写过的研究成果。也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位 或证书而使用过的材料，指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志对本研究 所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意。 研究生签名： i．1互L 时间： 2·侈年口多月咕El 学位论文使用授权书 注：保密学位论文(即涉及技术秘密、商业秘密或申请专剩等潜在昔要提交保密的 论文)在解密后适用于本授权书。 学位论文作者签名：i．1玉立 导师签名：卿雠， 签名日期：弘I箩年衫月◆多日 签名日期： 易l乡犁形月够日 万方数据 含硒复合物对犬乳腺肿瘤细胞CTMl211的抑制作用及其机制研究目 含硒复合物对犬乳腺肿瘤细胞CTMl211的抑制作用及其机制研究 目 录 摘要 ．i Abstract．．．．．． ．．．．．．． ． ． ．．．．．． ．．．．．．．．．．．．． ．． ． ． ． ．．．．．．． ． ． ．．．．．．． ．． ． ． ．．iii 缩略语 ．v 刚舌 ．． 1 1．1硒概述 1 1．1．1简介 l 1．1．2形态与性质 ．．． ．．2 1．1．3硒与人体健康 ．5 1．2乳腺癌概述 6 1．2．1癌症简介 ．6 1．2．2乳腺癌简介 ．6 1．2．3乳腺癌防治研究 ．7 1．3肿瘤与血管生成 8 1．3．1肿瘤微环境与血管生成 ．．8 1．3．2抗血管生成疗法 10 1．3．3血管生成相关因子VEGF、PTEN、HIF．1 O【、Ang ．12 1．4硒的抗癌作用 ．13 1．4．1硒抗癌作用简介 13 1．4．2硒抗癌功能与其浓度、形式等的关系 ．14 1．4．3硒抗癌机制研究 15 2材料和方法 18 2．1实验材料 ．18 2．1．1主要仪器 18 2．1．2主要材料 19 2．1．3主要溶液的配制 20 2．2试验方法 ．22 2．2．1细胞体外培养 22 万方数据 华中农业大学2015届硕士研究生(毕业)论文2．2．2试验设计 华中农业大学2015届硕士研究生(毕业)论文 2．2．2试验设计 一23 2．2．3 MTT法测细胞存活率 一24 2．2．4细胞凋亡率检测 25 2．2．5细胞免疫组化 一26 2．2．6荧光定量 一27 3实验结果与分析 30 3．1细胞培养 30 3．2 MTT法测药物对细胞存活率的影响 一30 3．2．1显微镜下细胞图像 30 3．3流式细胞仪测药物对细胞凋亡率的影响 ～37 3．4免疫组化法测药物对相关蛋白活性的影响 39 3．4．1显微镜下各组细胞图像 39 3．4．2各组蛋白相对活性 41 3．5 RT-qPCR测药物对相关mRNA表达量的影响 ．．43 4讨论 ．．46 4．1硒的抗癌机制探讨 ．46 4．2三种含硒复合物的抑癌效果分析 一47 ·4．3含硒复合物的抑癌机理探究 一48 4．4硒对四种肿瘤血管生成相关因子的影响 一50 5结论 ．．51 参考文献 一52 发表文章 一63 II 万方数据 含硒复合物对犬乳腺肿瘤细胞CTMl211的抑制作用及其机制研究摘要 含硒复合物对犬乳腺肿瘤细胞CTMl211的抑制作用及其机制研究 摘要 癌症是一种难以控制的疾病，且其发病率在不断上升，严重威胁人类健康，乳 腺癌是其中最常见的癌症之一。硒作为一种必需微量元素，能从生长抑制、免疫调 节、细胞凋亡、抗氧化、血管生成等多个方面防治癌症，而硒抗击癌症的具体机制、 合适剂量、具体形式和联合用药方式等方面的研究均比较缺乏。硒防治癌症这一功 能的发挥有赖于硒对肿瘤微环境的调节，与肿瘤血管生成相关联的诸多因子在其中 起着重要的作用。VEGF．a和Ang．2分别促进微血管生成和内皮细胞出芽，共同促 进肿瘤血管的成熟，同时激活基质降解酶使内皮细胞便于出芽和移行，为肿瘤转移 和发展提供可能；HIF—la是一种氧敏感性转录因子，其在肿瘤组织中的水平高于正 常组织，当微环境缺氧、肿瘤恶化时进一步升高，可调控肿瘤干细胞生存及自我更 新的能力，对调节肿瘤微环境、促进肿瘤迁移和侵袭具有重要意义；PTEN是一种 抑癌基因，PTEN可以拮抗P13K，催化磷酸肌醇的转化，抑制P13K-Akt依赖性细胞 增殖、迁移和肿瘤血管生成。宠物犬与人类处于相同的生活环境中，以犬乳腺癌细 胞作为研究模型，对研究硒对乳腺癌的防治作用，具有实际意义。因此，研究不同 剂量、形