贵州省布鲁氏菌血清学监测及其分子特征研究-免疫学专业论文.docxVIP

贵阳医学院2013 贵阳医学院 2013 届硕士研究生论文 PAGE PAGE 10 贵州省布鲁氏菌血清学监测及其分子特征研究 研究生 王 月 导师 左丽 教授 摘要 目的：了解贵州省人间和动物间布鲁氏菌感染状况，分析病原体特征,从分子水 平阐述患者和动物来源菌株间的相互关系，揭示潜在的传染源，为贵州省布鲁氏 菌病的预防和控制提供病原学依据。 方法：按照全国人间布鲁氏菌病监测方案，采集贵州省 2010～2013 年 3 月布鲁 氏菌病监测及疫情处置血清标本，采用虎红平板凝集试验（RBPT）及试管凝集 试验（SAT）定性和定量检测布鲁氏菌抗体；对布病可疑患者和患病动物全血采 用血培养法分离布鲁氏菌，采用传统方法和 PCR 方法鉴定布鲁氏菌的种型，应 用脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析菌株的分子多态性。 结果：血清学监测结果显示，2010～2013 年共检测血清标本 898 份，其中人血 清 754 份，布病抗体阳性 72 份，阳性率 9.55%； 狗血清 55 份，布病抗体阳性 3 份，阳性率 5.45%；羊血清 31 份，布病抗体阳性 10 份，阳性率 32.26%；猪血 清 58 份，布病抗体阴性。细菌分离结果显示，2010～2013 年间共检测标本 153 份，其中人全血标本 139 份，检出布鲁氏菌株 8 株，检出率 5.76%。动物全血标 本 11 份，检出布鲁氏菌株 4 株，检出率 36.36%。病羊内脏 3 份，未检出布鲁氏 菌株。传统方法和 PCR 方法检测结果显示 12 株菌株均为羊种 3 型布鲁氏菌；PFGE 分析显示，羊和患者来源菌株经 Xba1 酶切产生 10-20 条清晰条带，其 PFGE 带 型高度相似。 结论： 1. 人、羊、犬血清抗体阳性及分离出的布鲁氏菌株提示贵州省人、羊和犬均有 布鲁氏菌感染的情况存在 。 2. PCR、PFGE 分析显示人、羊来源菌株 PFGE 带型高度相互关系，提示羊可能 为贵州省布鲁氏菌的主要传染源。 关键词：贵州省 布鲁氏菌 布鲁氏菌抗体 PCR PFGE 前 言 布鲁氏菌病（Brucellosis，简称布病）是由布鲁氏菌属（Brucella）的细菌侵 入机体，引起的人兽共患的传染-变态反应性疾病，是《中华人民共和国传染病 防治法》规定报告的乙类传染病[1]。布鲁氏菌是革兰氏阴性胞内寄生菌，能感染 许多种动物和人。目前，根据致病性及宿主的不同将布鲁氏菌分成 6 个种，即牛 种布鲁氏菌（B. abortus）、犬种布鲁氏菌（B. cannis）、羊种布鲁氏菌（B. melitensis）、 沙林鼠种布鲁氏菌（B. neotomac）、绵羊附睾种布鲁氏菌（B. ovis）和猪种布鲁 氏菌（B. suis）。布病在家畜中牛、羊、猪最常发病，且可以由牛、羊、猪传染 给人和其他家畜。该病在世界范围内广泛流行，在世界上 200 多个国家和地区中 报告有人、畜布病疫情的约有 170 个，人间发病率波动范围较大[2]。我国也是布 病的高发国家，新疆、青海、西藏、内蒙古等地区尤为严重，发病率已超过 1/10 万[3]。布病造成的危害是双重的，即影响人的身体健康，又影响畜牧业发展，造 成严重的经济损失[4]。 贵州省畜间布病疫情从二十世纪 50 年代已有报告，牛、羊畜群的布病抗体 阳性率为 0.18%～2.2%。1983～1992 年贵州省在全省开展布病感染情况调查和 病原学研究，结果显示牲畜养殖、交易和畜产品加工等职业人群中布病抗体阳性 率为 0.08%～2.57%，牛、猪、犬等畜群中的布病抗体阳性率为 0.96%～21.6%， 并先后从病猪的病料和阳性犬中检获猪种Ⅰ型布鲁氏菌和犬种布鲁氏菌[5,6] 。 2005 年卫生部和中国 CDC 将贵阳市列为国家级人间布病监测点，此后每年在职 业人群和农区人群中开展布病监测。结果显示，从 2005 年～2009 年，每年均在 人及动物血清中检出布病抗体阳性，但未检出布鲁氏菌，也未发现布病患者[7]。 2010 年贵阳市乌当区报告首例布病患者，系饲养奶牛工人[8]。此后，2011 年～ 2013 年各年都有病例报告，且局部地方有畜间或人间爆发疫情[9]，疫情扩散到全 省多个地区[10] 。 人间布病作为贵州省的新发传染病，其感染状况及病原学特征、传染源等尚 不清楚。有效的检疫是预防和控制布病的重要手段[11]。国内外学者研究了许多诊 断方法，用于布病检测。布鲁氏菌血清学检查技术有基于凝集反应原理的[12,13]： 如试管凝集反应（SAT）和虎红平板凝集试验（RBPT），SAT 检测 IgM 敏感性 较高，是我国卫生行业标准规定的布病诊断检验方法，具有较高的诊断价值。但 SAT 不能区分人工免疫和自然感染，对部分慢性期布病患者容易得