含氢乳酸钠林格液对减轻小鼠供体心脏移植冷缺血再灌注损伤作用的研究-外科学(胸外)专业论文.docxVIP

贵阳医学院 贵阳医学院 2013 届硕士研究生论文 PAGE PAGE 10 含氢乳酸钠林格液对减轻小鼠供体心脏移植冷缺血再灌注损伤作用 的研究  专业：外科学（胸外） 研究生：谢波 导师：吴观生、朱平 教授 摘要：目的 氢气被发现作为一个有效的气体抗氧化剂，可与体内活性氧（ROS） 中的羟自由基（-OH）、亚硝基（ONOO-）选择特异性的结合，发挥氧自由基清除 剂的作用，从而减轻或消除因为过量的 ROS 引起的病理生理损伤。本课题拟探索 富含氢气的乳酸钠林格液能否减轻同系小鼠异位心脏移植过程中供体心脏的冷 缺血再灌注损伤。 方法 采用日本 MIZ 会社生产的制氢剂（Aquela），制备 4℃含氢浓度为 4ppm 饱 和乳酸钠林格液，将小鼠心脏离体后保存于含氢乳酸钠林格液中，保存 30min 后 进行同系小鼠颈部异位心脏移植。于心脏移植后恢复血供前，即缺血再灌注前 3min 予腹腔注射 37℃含氢乳酸钠林格液 1ml，并于术后每隔 12h 腹腔注射 0.5ml 含氢乳酸钠林格液。而对照组均相应使用不含氢的普通乳酸钠林格液。分别于再 灌注后 24h、48h、72h 后检测小鼠血清的心肌酶谱，观察移植心脏组织形态学变 化，检测心肌细胞凋亡情况，炎症因子基因表达水平以及 MDA 蛋白表达水平。 结果 心脏移植再灌注后 24h 时，含氢乳酸钠林格液治疗组与对照组相比血清中 心肌酶谱的肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST） 显著降低（P 均＜0.01），再灌注 48h 时实验组血清心肌酶谱中 CK、LDH、AST 仍 明显低于对照组小鼠（P 均＜0.01），而再灌注 72h 时血清中心肌酶谱无显著差 异（P 均＞0.05）。移植物组织 HE 染色发现含氢组间质水肿，心肌结构，炎症细 胞浸润较对照组有显著改善。心肌细胞 Tunel 凋亡检测发现再灌注 24h 含氢组较 对照组有显著的降低（P＜0.01），再灌注 48h 实验组较对照组有显著的降低（P ＜0.05），而再灌注 72h 二组无显著差异（P＞0.05）。实时荧光定量 RT-PCR 检测 发现再灌注 24h、48h、72h 时移植物炎症因子基因表达水平 IL-1β、IL-6、MCP-1、 TNF-α均较对照组有显著降低（P 均＜0.01），内源性配体 HAS-1，HMGB-1 也有 显著降低（P 均＜0.05）。移植物组织 MDA 检测发现再灌注 24h、48h、72h 时实 验组较对照组显著降低（P＜0.01；P＜0.01；P＜0.05）。 结论 本研究结果显示含氢乳酸钠林格液能有效的减轻小鼠心脏移植过程中的 冷缺血再灌注损伤，并可能通过减少心肌细胞坏死及心肌细胞凋亡，抑制缺血再 灌注损伤引起的炎症细胞浸润及炎症因子基因上调，减轻移植心脏 ROS 蓄积引起 的组织氧化损伤，保护心肌细胞的完整性，促进移植心脏功能的恢复，具有重要 的临床应用前景。 关键词：氢气，活性氧（ROS），冷缺血再灌注损伤，细胞凋亡，心脏移植 前言 心脏移植（Heart transplantation）作为心脏器质性疾病的终末期唯一有 效的治疗手段[1]，在现代的心脏外科临床中占据着至关重要的作用。心脏移植过 程主要包括几个组成部分，即供体心脏的来源，器官的保存，器官的运输，及供 体心脏的植入手术。由于现代交通运输及供体来源短缺的特殊性等问题，及植入 手术的复杂性所制约，严重影响着心脏移植的手术成功率及植入心脏后近、远期 的生存率等。目前临床认为心脏能耐受的缺血时间为 4-6h [2-4]，主要是因为心脏 作为一个动力器官，在植入后数小时即需要承担起机体的循环负荷；相较而言， 肝脏及肾脏等器官的保存时限可超过 24h 甚至更长时间的保存而能恢复正常功 能。大量的研究发现，与心脏移植近期及远期生存率最重要的因素是器官的保存 时间长短及植入手术的时间，且二者呈正相关的关系[5]。因此如何进一步探索新 的心脏保存方法而使其的保存时间延长，以及如何减少冷缺血再灌注损伤成为心 脏移植基础及临床研究中的核心任务。 在心脏移植过程中，供体常保存于低温的保存液中运输；经植入手术后，恢 复血供，这一过程可导致供体心脏冷缺血损伤及再灌注损伤。如何去减少低温对 心肌组织造成的损伤及再灌注损伤成为众多研究者的目标。目前研究发现供体器 官的缺血再灌注损伤导致的氧化应激主要取决于供体器官的来源，比如活体还是 尸体，存储条件及存储时间，组织之间的配型情况，移植手术的难度及对受体的 创伤等情况，值得注意的是强烈的氧化应激一般发生在移植物植入后,血液供应 恢复期间[6]。心肌细胞内含有大量的线粒体,在缺血再灌注期间线粒体等产生的 过量 ROS 常引起显著的心肌细胞损伤以及心功能减退[7]。缺血再灌注