烟草NtDXS2基因的克隆及表达分析-烟草科技.PDF

2018 年 11 月 烟草科技 Nov. 2018 第51 卷第 11 期 Tobacco Science Technology Vol. 51 No. 11 烟草NtDXS2基因的克隆及表达分析 罗朝鹏，李泽锋，张剑锋，王 中，谢小东，魏 攀，武明珠，杨 军，李 锋* 中国烟草总公司郑州烟草研究院，郑州高新技术产业开发区枫杨街2号 450001 摘要：1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶（1-Deoxy-D-xylulose 5-phosphate synthase, DXS ）是萜类化合物 合成过程中的限速酶。为明确DXS2 基因在烟草萜类化合物合成中的作用，利用RACE 技术从普通烟草 中克隆了NtDXS2 基因，分析NtDXS2 的序列特征以及NtDXS2 在不同组织、水杨酸处理中的表达。结果 表明，NtDXS2 cDNA 全长2 407 bp ，编码713 个氨基酸。NtDXS2与番茄DXS2氨基酸序列的一致性最高， 为91.1% ；与NtDXS1氨基酸序列的一致性为69.2% 。亚细胞定位及蛋白结构域预测结果显示，NtDXS2 定位于叶绿体，含有DXS的保守功能域。进化分析表明，NtDXS2属于DXS2亚家族，与番茄DXS2亲缘关 系最近。qPCR 结果表明，NtDXS2 在叶中表达量较高，在根和雄蕊中表达量较低，在雌蕊和萼片中几乎 不表达。在水杨酸处理下，NtDXS2 的表达量升高，推测NtDXS2 可能参与烟草叶片腺毛中萜类次生代谢 物的合成以及烟草的抗病反应。 关键词：烟草；NtDXS2 ；RACE ；表达分析 中图分类号：TS413 文献标志码：A 文章编号：1002-0861 （2018 ）11-0001-07 Cloning and expression analysis of NtDSX2from Nicotianatabacum LUO Zhaopeng, LI Zefeng, ZHANG Jianfeng, WANG Zhong, XIE Xiaodong, WEI Pan, WU Mingzhu, YANG Jun, LI Feng* Zhengzhou Tobacco Research Institute of CNTC, Zhengzhou 450001, China Abstract ：1-Deoxy-D-xylulose-5-phosphate synthase （DXS ）is a rate-limiting enzyme in the synthesis of terpenoids. To reveal the potential function of DXS2 in tobacco isoprenoid biosynthesis, NtDXS2 was cloned from Nicotiana tabacum by Rapid Amplification of cDNA Ends （RACE ）technology. The sequence characteristics and expression patterns of NtDXS2 in different tissues and salicylic acid treated leaves were analyzed. The results showed that the full-length cDNA of NtDXS2 was 2 407 bp, which encoded 713 amino acids. Amino acids sequence of NtDXS2 matched that of tomato DXS2 and NtDXS1 with the identity of 91.1% and 69.2% , respectively. The prediction results of subcellular localization and protein domain indicated that NtDXS2 might be located in chloroplast and contained the