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金针菇液体菌种培养基和培养条件优化 摘要：液体菌种的应用是金针菇工厂化生产的关键技 术和发展趋势。本研究以金针菇21作为供试菌株，通过摇 瓶培养，比较了不同碳源和氮源对液体菌种质量的影响，结 果发现，玉米粉为最佳碳源，获皮为最佳氮源；通过正交试 验对培养条件进行优化，结果显示，摇床转速150 r/min、 装液量60 mL （三角瓶，250 mL容量）、接种量12% （V/V）、 培养温度221时所得液体菌种质量最优，菌丝干质量达 1. 821 5 g/100 mLo栽培试验结果显示，菌龄5 d的液体菌 种最适合栽培应用，栽培周期比使用固体菌种短，产量也高 约 5. 8%o 关键词：金针菇；液体菌种；培养基；培养条件；优化 中图分类号：S646. 1+5文献 金针菇（Flammulina velutipes）是一种优质食用菌， 富含蛋白质、氨基酸、维生素、矿质元素等多种营养物质［1］, 以及朴菇素（Flammutn）、蒜菇素、金针菇原素（Flamn）等 功能活性成分，具有抗肿瘤、调节免疫力、促进智力发育、 护肝等作用［2］,早已成为人们熟知的保健食品。随着技术 的革新和国内外市场需求的增长，金针菇生产方式已由传统 作坊式、季节性生产，向设施化、工厂化生产方式转变［3］。 作为金针菇工厂化栽培的关键技术之一，液体菌种具有生产 周期短、接种便利、菌丝分散性好、萌发点多、生长快、成 品率高等优点，液体菌种的应用已成为食用菌菌种及规模 化、工厂化生产的发展趋势［4］。本研究采用液体摇瓶培养, 对金针菇液体菌种的培养基和培养条件进行了优化，以期为 金针菇栽培技术的提升提供科学依据。 1材料与方法 1. 1试验菌株 金针菇21,购自华中农业大学菌种实验中心。 1.2培养基 碳源筛选培养基在基础培养基（蛋白脓1%, KH2P04 0. 1%, MgS04 0. 05%,维生素 Bl 1 mg/L） 中，分别加入 2% 的葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、玉米粉4种碳源，121?1261 灭菌20 min,冷却备用。 氮源筛选培养基在基础培养基（葡萄糖2%, KH2P04 0. 1%, MgS04 0. 05%,维生素 Bl 1 mg/L） 中，分别加入 2% 的蛋白豚、酵母膏、魏皮3种氮源，灭菌，备用。 培养条件优化培养基玉米粉2%、麦夫皮1%、酵母粉 0.5%、葡萄糖 1%、KH2P04 0. 1%. MgS04 0.05%、CaC03 0. 2%、 维生素Bl 1 mg/Lo 固体菌种培养基小麦98%、白糖1%、石膏1%O小麦 在清水中浸泡6?8 h,吸足水分，然后煮熟（不开粒），捞 出沥干水，加入石膏粉、白糖拌匀，分装瓶中，灭菌，备用。 栽培培养基棉籽壳培养基（干料）：棉籽壳78%、麦夫 皮20%、蔗糖1%、CaCO3 1%,加水搅拌至含水量60%,装袋 （每袋折合干料300 g）,灭菌，冷却待用。 1. 3菌种活化 菌种斜面接种到PDA平板，25€恒温培养8 d,备用。 1.4碳源、氮源的筛选 每种不同培养基设置3个重复，用直径0.2 cm的打孔 器在活化的菌种平板上打孔，摇瓶容量250 mL,装液量70 mL, 接活化菌种5块，25°C静置24 h后，150 r/min摇瓶培养5 d,观察菌丝球形态，测定菌丝体生物量。 1.5菌丝体生物量测定 取50 niL摇匀的培养液，过滤收集菌丝，蒸馆水洗涤至 水变清后，将菌丝球置于恒重过的定性滤纸之上，于干燥箱 6（TC烘至恒重后称量［5］。 1.6液体菌种培养条件的优化 一级种子的制备将PDA活化的菌种经打孔后接种到 液体培养基，恒温25°C, 150 r/min条件下培养2 d,作为 种子备用。 摇瓶发酵条件的优化三角瓶容量250 mL,接种上述 种子液进行摇瓶发酵，根据已有报道［5?7］,以摇床转速、 装液量、接种量及培养温度为4个因素，采用L9 （34）正交 试验设计，详见表1,共培养 5 d,以菌丝体生物量为考察指标，进行培养条件优化, 获得最佳摇瓶发酵培养条件。 1. 7最佳接种菌龄的确定 发酵培养基在最优条件下制备液体菌种，菌龄分别设4、 5、6 d三组，经轻微绞碎后，接种到棉籽壳培养基，每组 20袋，观察菌丝长满所耗的时间及菌丝的生长状况。 1.8固体菌种的制备 将活化好的PDA菌种平板接种到麦粒菌种培养基，在 25°C.相对湿度75%左右条件下培养至满袋后，继续培养1 周，待用。 1.9出菇试验 分别将固体和液体菌种（菌龄5d）接种10 g （或10 mL） 到棉籽壳培养基中，各50袋，24￡、相对湿度75%左右条件 下培养至满袋，继续1周后转入13?14￡菇房，相对湿度 85%?90%,出菇两茬[8],记录长满、现蕾时间及鲜菇产量, 计算生物学效率，生物学效率（%）二子实体鲜质