过度训练大鼠肾组织细胞周期调节蛋白cyclinD1、CDK4、P27的表达及山莨菪碱干预的影响-内科学专业论文.docxVIP

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河北医科大学 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下,由本人独立完成。 本学位论文研究所获的研究成果,其知识产权归河北医科大学所有。 河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学 位论文主要内容相关的论文,第一署名单位为河北医科大学,试验材 料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则, 承担相应的法律责任。 研究生签名:嘈、雷 导 币 签 名 、、, 献领 导 名 f考∥万绚讲年 学弓 月j ≥ 雠徊, 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了 文中特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写, 文责自负。 研究生签名:\学、季 导师签名: 羔觞 州年多月刁日 中文摘要过度训练大鼠肾组织细胞周期调节蛋白cyclinDl、 中文摘要 过度训练大鼠肾组织细胞周期调节蛋白cyclinDl、 CDK4、P27的表达及山莨菪碱干预的影响 摘 要 目的:过度训练可导致急性肾损伤,肾组织细胞凋亡是 其损伤的细胞学基础及主要特征,但其凋亡机制尚不清楚。 近年来随着对细胞增殖、分化、凋亡等研究的深入,人们对 细胞周期调节蛋白的认识也日渐丰富。研究表明,细胞周期 调节蛋白在细胞增殖、分化、凋亡中起着不可或缺的作用。 本研究通过大鼠游泳至力竭,建立过度训练致急性肾损伤模 型,研究细胞周期调节蛋白cyclinDl、CDK4、P27在肾组织 中的表达及其意义,观察山莨菪碱对cyclinDl、CDK4、P27 表达的影响,旨在加深对过度训练致急性肾损伤发病机制的 认识,为临床防治提供新的思路和方法。 方法:(1)选取36只健康雄性Wistar大鼠,体重l 80—200 g。将大鼠随机分为3组:正常对照组(CN)、力竭组(ES)、 山莨菪碱干预组(AD)。CN组为安静对照组,未进行力竭 运动;根据力竭后恢复时间将ES组分为即刻组(ESI)、力 竭6小时组(ES 6h)、力竭24小时组(ES 24h);AD组于 运动前20分钟腹腔注射山莨菪碱(10 mg/Kg)后进行力竭 运动,分为山莨菪碱6小时组(AD 6h)、山莨菪碱24小时 组(AD 24h)。每个时间点均为6只大鼠。(2)采用大鼠无 负重游泳至力竭建立过度训练致急性肾损伤模型。力竭标 准:1)大鼠沉入水底超过十秒不能浮出水面:2)游泳动作 明显不协调;3)大鼠捞出后没有逃避反应,且放在平面无 中文摘要法完成翻正反射。为了保证大鼠有足够的活动空间和避免由 中文摘要 法完成翻正反射。为了保证大鼠有足够的活动空间和避免由 于观察不及时大鼠发生溺水,每次实验每组大鼠各1只。(3) 各组大鼠应用乙醚吸入麻醉,于相应时间点留取各组大鼠左 肾置于4%多聚甲醛中固定,备行石蜡切片:取各组大鼠右 肾沿纵切面均分为两部分,置于一80℃冰箱保存,待行Western blot检测。(4)组织经固定后采用免疫组织化学SP法检测 肾组织中细胞周期调节蛋白cyclinDl、CDK4、P27的表达情 况。(5)应用病理图像分析系统对免疫组织化学结果进行半 定量分析。(6)采用Western blot检测cyclinDl、CDK4、P27 的表达情况。(7)所有数据用i±S表示,采用SPSS统计软 件进行统计分析,组间差异用单因素方差分析(one way ANOVA),有显著差异者用Newman Kuels q检验进行两两 比较,以P0.05认为有统计学意义。 结果:l免疫组织化学显示:对照组大鼠肾组织可见 cyclinDl、CDK4的阳性表达;力竭运动后即刻组肾脏 cyclinDl、CDK4表达较对照组均有所降低;力竭后6小时 较即刻组表达降低更加明显;力竭后24小时表达水平有所 恢复,且高于对照组,山莨菪碱干预6小时组肾组织 cyclinDl、CDK4表达高于同期单纯力竭组;山莨菪碱干预 24小时组肾脏cyclinDl、CDK4表达低于同期单纯力竭组。 对照组大鼠肾组织可见P27的弱表达;力竭运动后即刻组肾 组织P27表达较对照组有所升高:力竭后6小时表达高于即 刻组;力竭后24小时表达较力竭后6小时降低,且仍高于 安静对照组;山莨菪碱干预6小时及24小时组肾组织P27 表达均低于同期单纯力竭组,但较正常对照组表达有所增 高。 中文摘要2图像分析显示:CN组大鼠肾组织均有cyclinDl、CDK4 中文摘要 2图像分析显示:CN组大鼠肾组织均有cyclinDl、CDK4 的大量表达;ESI、ES 6h组cyclinDl、CDK4表达较CN组 降低(PO.05);ES 24h组表达较ES 6h组增高(PO.05),

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