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第 二 军 医 大 学 学 报
2006 Oct ;27 ( 10)
·10 76 ·
Acad J Sec Mil Med U niv
·论 著 ·
利用载体介导的 RNA 干扰技术抑制人骨肉瘤细胞 HOS8603 内维生素
D3 受体的表达及功能
1 2 1 1
张 晔 ,朱晓燕 ,刘宇健 ,卢 建
( 1. 第二军医大学基础医学部病理生理学教研室 ,上海 200433 ;2 . 基础医学部生理学教研室)
( )
[摘要] 目的:构建由载体介导的抑制人维生素 D3 受体 VDR 表达的 RN A 干扰载体 ,并在人骨肉瘤细胞中初步研究其对
VDR 表达及功能的影响 。 通过在线筛选设计了两段针对人 VDR 的 RN Ai 序列 ,并与载体 p Silencer2 . 1U 6 连接 ,获得
方法 :
了表达载体 p Silencer2 . 1U 6VDR 1 与 p Silencer2 . 1U 6VDR2 。利用脂质体转染法分别转入人骨肉瘤细胞系 HO S8603 细
胞中 ,通过 West ern 印迹法检测其对内源性 VDR 蛋白表达 、对 1 ,25二羟维生素 D3 [ 1 ,25 (O H) 2 D3 ]激活 P KC 作用的影响 ,利
用细胞计数和 M T T 的方法检测其对 1 ,25 (O H) 2 D3 抑制 HO S8603 细胞增殖作用的影响 。结果 :在分别转染 p Silencer2 . 1
U 6VDR 1/ 2 的 HO S8603 细胞中 ,与对照细胞比较 , 内源性 VDR 蛋白的表达 、1 ,25 (O H) 2 D3 对细胞的增殖抑制作用以及 1 ,
25 (O H) 2 D3 快速诱导 P KC 磷酸化的作用均有显著降低 。结论 :构建的表达载体 p Silencer 2 . 1U 6VDR 1 与 p Silencer 2 . 1
U 6VDR2 均能在细胞水平显著抑制内源性 VDR 基因的表达 ,并能有效阻断一些由VDR 介导的 1 ,25 (O H) 2 D3 生物学作用 ,
为进一步研究 VDR 与维生素 D3 的功能提供了一个有用工具 。
[ 关键词] RN A 干扰 ;骨肉瘤 ;受体 ,维生素 D3
( )
[ 中图分类号] R 738 . 1 [文献标识码] A [文章编号] 0258879X 2006
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