黄酮3常规分离法.pptVIP

二 两相溶剂萃取法 P15 （一）基本原理 定义：简称萃取法，往提取液中加入一种与其不溶的溶剂配成两相溶剂系统，利用混合物中各种成分分配系数k的差异而达到分离方法。 萃取时如果各成分在两相溶剂中分配系数相差越大，则分离效率越高。 分配系数（K） 当物质在两相互不相溶的溶剂中（如水和丁醇，氯仿），于分液漏斗中充分振摇，放置后，即可分为两层，此时，溶质将分别溶于两层溶剂中，并在一定温度，压力下为一常数，此时，溶质在两层溶剂中的浓度比值为一常数（K），用公式表示如下： K=CU/CL CU：上层浓度，CL：下层浓度。 若有两种成份时（A，B），则A，B各有其分配系数KA，KB，则两者差别越大，分离效果越好。 如，KA＝10说明振摇一次平衡后，A则有90％以上溶于上层溶液中。 而KB＝0.l时，振摇一次平衡后，B则有90％以上溶于下层中，过样A和B两成份就有较大程度分离，连续分离萃取几次，就可能达到A，B的全部分离。 若有多种成份时，分离情况将更复杂。 两成份的分配系数差别越大，两者就越容易分离。因此两成份的分配系数比就可以反应其分离的难易程度，过个比值称为分离因子（β），用公式表示为： β ＝ KA /KB 一般说；β≥100 一次萃取就可以实现基本分离， 100＞β＞10 则需萃取10—12次， β＜2需连续萃取100次以上，才能基本分离， β＝1时，则KA=KB两者性质相近，无法分离。 简单萃取法操作： 仪器：分液漏斗（少）、下口瓶（中）、萃取缸（大） 操作：旋塞涂润滑剂→装入溶剂和待萃取物（1/3）盖塞子，倒转分液漏斗，开启旋塞排气后关紧→振摇，注意排气（重复数次）→于铁架台静置分层→分取萃取液 注意事项： 1.水提取液的密度：1.1～1.2 2.萃取次数：3～4 3.萃取溶剂用量：1/2～1/3（第一次）；1/4～1/6 4.避免产生乳化现象 萃取剂的选择 有机溶剂作萃取剂（水提取）。 如从水提液中萃取亲脂性性成分，一般选用苯、氯仿、 或乙醚等有机溶剂； 如从水提液中萃取中等极性成分，一般选用乙酸乙酯、丁醇等弱亲脂性有机溶剂或在氯仿、乙醚中加入适量乙醇以增大其亲水性。 用pH梯度萃取法的萃取剂（有机溶剂提取） 用pH梯度萃取法的萃取剂分离某有机溶剂中的黄酮类化合物，可依次选用pH由低到高的碱液如5%碳酸氢钠、5%碳酸钠、0.2%氢氧化钠、4%氢氧化钠的水溶液做萃取剂进行萃取，使成盐而达到分离目的 适用范围 适用于分配系数差异较大的成分的分离，一般萃取3~4次即可。若亲水性成分不易转入有机溶剂层，需增加萃取次数或更换萃取溶剂。 乳化形成原因 氯仿萃取 乳化的预防： 小量实验 将振摇改旋转混合 改用氯仿-乙醚混合溶剂萃取 加大有机溶剂量 乳化现象的处理： ①长时间放置 ②金属丝搅动 ③乳化层抽滤 ④乳化层加热或冷冻 黄酮类萃取法分离依据 1、溶剂萃取法分离依据 成分(黄酮与杂质、苷与苷元 、苷元与苷元)之间的极性（分配系数K）差异。 2、PH梯度萃取法分离依据： 游离黄酮类化合物的酸性差异。 * 知识链接：提取液的浓缩方法P13 提取所得到的是一个庞大的混合物，如果要得到更多的成分，或者要系统地研究一味中药中的化学成分，则需经过比较复杂的过程，一般是经过初步分离纯化，得到某一类型的总成分（混合物），或者得到极性相近的一混合物，再经过进一步分离得到单体成分。分离方法有很多种。 一般提取方法（如渗漉法、回流提取法）得到的提取液体积较大，所含成分浓度低，不利于分离纯化。 为了提高浓度，节省分离纯化的时间和减少工作量，要对提取液进行浓缩。 浓缩可通过蒸发或蒸馏完成。 要避免热敏性成分被破坏 浓缩常用方法有： 蒸发 常压蒸馏法 减压蒸馏法 薄膜蒸发法 反渗透法 超滤法 常压蒸馏法 适用于溶剂沸点低、有效成分受热不易分解的提取液的浓缩，如氯仿、乙醚、石油醚等的提取液。注意火源。 减压蒸馏法 适用于溶剂沸点高，有效成分受热易分解的提取液的浓缩，一般当溶剂沸点超过70℃时，可采用减压浓缩。 HPLC色 谱 （二）分离 分离依据： 成分(黄酮与杂质、苷与苷元 、苷元与苷元)之间的极性（分配系数K）差异。 分离依据： 游离黄酮类化合物的酸性差异。 pH梯度萃取法 溶剂萃取法 柱色谱法 常用聚酰胺和硅胶色谱。 （1）聚酰胺柱色谱