化妆品的微生物学检查.ppt

2.分离培养目的 经增殖培养后,被检菌大量繁殖，同时其他一些杂菌也出现增殖。因此分离培养能使目的菌从混合菌中分离出来。 3.纯培养目的 只是大量增殖被检菌，用于后面的进一步检验。 4.染色镜检目的 初步鉴定，观察细菌的形态大小。 5.生化试验目的 最终的鉴定依据，结合染色镜检得出实验结果，填写检验报告。 粪大肠菌群 粪大肠菌群系一群需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌，在44.5℃±0.5℃培养24h～48h 能发酵乳糖产酸并产气。 粪大肠菌群主要存在于温血动物粪便中，随粪便排出体外后可直接污染化妆品，若产品中检出该菌群，表明该产品受到粪便污染，可能存在肠道致病菌并引起疾病，是评价化妆品卫生质量的重要指标之一。 产酸：黄色 产气：气泡 双倍胆盐乳糖M EMB琼脂 液面玫瑰红色 紫黑色 靛基质试验 粪大肠菌群检查结果报告 根据发酵乳糖产酸产气，平板上有典型菌落，并经证实为革兰氏阴性短杆菌，靛基质试验阳性，则可报告被检样品中检出粪大肠菌群。 铜绿假单胞菌 铜绿假单胞菌属于假单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生绿脓菌素。此外还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐，在42℃±1℃条件下能生长。 化妆品的微生物学检查 主要内容 化妆品的卫生标准 化妆品微生物学检查基础知识 化妆品中微生物总数检查 化妆品中控制菌检查 化妆品原料中的微生物 0级 酸、碱、醇等，本身具有杀菌功能，无需检测 1级 无水脂类、矿物油、凡士林、硬脂酸等，含极少量微生物，本身中等抗菌能力，只需一次检查； 2级 原料含少量微生物，被水稀释后能成为微生物营养物，如甘油、山梨醇等，一年检查一次； 3级 具有微生物污染风险。表面活性剂、增泡剂、水解蛋白溶液、芦荟胶。需防腐体系。每批抽样检查 4级 极高微生物污染风险，去离子水。 化妆品微生物污染途径 一级污染 二级污染 防止微生物污染的措施 3个操作因素：消毒、清洁措施、员工培训； 5个工程因素：设备、厂房、仓库、水系统和空气系统的良好的可消毒设计。 执行HACCP，消毒标准的建立赢包括工厂的每一个区域和相关的功能设施。 化妆品微生物检验 原料和产品中的微生物数量是否达到执行标准； 检验用于化妆品和药品中的防腐剂的防腐效能 检验方法 APC法：好样平板计数法 防腐剂效能实验 检验方法可靠性 精确性——实验人员的实验技能 灵敏性、准确性——试验方法的合理性 目前参照执行的方法 USP法（美国药典） CTFA法（美国化妆品、盥洗用品及香料协会） ASTM法（美国检验方法及材料协会） 英国药物学方法 GB7918.1-87 相同点：测试微生物种类和恢复系统、测定APC方法相同。 不同点：培养温度、接种物的制备程序、培养时间 一、2007版“化妆品卫生规范” 粘膜用、婴儿及儿童用化妆品 眼部及口唇等 细菌菌落总数不得大于500CFU/mL 或500CFU/g。 其他化妆品 细菌菌落总数不得大于1000CFU/mL 或1000CFU/g 所有化妆品 霉菌和酵母菌总数不得大于100CFU／mL 或100CFU／g 每克或每毫升产品中不得检出粪大肠菌群、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌。 二、检查的必备知识 1.采样 采样应具有代表性。从两个包装单位以上的样品中共取10g 或10mL作为检验量。 样品应严格保持原有的包装状态。容器不应有破裂，在检验前不得打开，防止样品被污染。 接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。及时检验的样品应放在室温阴凉干燥处，不要冷藏或冷冻。 若样品需同时做多种分析，如细菌、毒理、化学等，则宜先取出部分样品做细菌检验，再将剩余样品做其它分析。 在检验过程中，从打开包装到全部检验操作结束，均须防止微生物的再污染和扩散，所用器皿及材料均应事先灭菌，全部操作应在无菌室内进行，或在相应条件下，按无菌操作规定进行。 如检出粪大肠菌群或其它致病菌，自报告发出之日起该菌种及被检样品应保存一个月。 2.供检样品（供试品）的制备 水溶性液体样品 样品 10mL 90mL生理盐水 1:10供试液 2.供检样品（供试品）的制备 油性液体样品 ②5mL灭菌液体石蜡 1:10供试液 ③10mL灭菌吐温80 40~44℃ ①10mL样品 混匀 10min ④75mL 40~44℃灭菌生理盐水 40~44℃ 乳化 均质器 2.供检样品（供试品）的制备 亲水性半固体（膏、霜、乳剂）样品 振荡 ②90mL生理盐水 ①10g样品 15min 上清液作为1:10供试液 膏、霜剂若用均质器，混合均质1~2min即可。 2.供检样品（供试品）的制备 疏水性半固体样品 ②5mL灭菌液体石蜡 1:10供试液 ③10mL灭菌吐温80 40~44℃ ①10mL样品 混匀 10