赤狐皮肤黑色素细胞的分离与体外培养.pdfVIP

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2019-07-29 发布于浙江
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赤狐皮肤黑色素细胞的分离与体外培养.pdf

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ofSouthern 2015，46(8)：151l—1515 南方农业学报Journal A鲥culture NNXAAB ISSN2095—1191：CODEN 191．2015．08．1511 DOI：10．3969U：issn．2095—1 赤狐皮肤黑色素细胞的分离与体外培养鲍加荣，刘学庆，岳志刚，杨福合+ (中国农业科学院特产研究所／吉林省特种动物分子生物学省部共建国家重点实验室，长春130112) 摘要：【目的】建立一种适合赤狐皮肤黑色素细胞的分离和体外培养体系，为研究毛色形成的分子机理提供必要 growthfactor， II和胰酶两步消化，以添加有表皮生长因子(Epidermal 载体。【方法】采集赤狐的皮肤样品，经Dispase extract， 13一acetate，TPA)和牛垂体提取物(Bovinepituitary EGF)、十四烷酰佛波醇乙酸酯(12一O—tetradecanoyl—phorbol BPE)的K．SFM培养基进行原代和传代培养，再通过形态观察、用酶标仪测定黑色素含量、多巴染色结合透射电镜观察、毛色基因RT．PCR检测等方法对体外培养获得的黑色素细胞进行鉴定。【结果】体外培养获得的赤狐皮肤黑色素细胞有2或3个树突，胞质内含有大量的黑色素小体，经测定第3、4和5代细胞的黑色素含量分别为0．0283、0．0276和 0．0265 TYR、TYRPI、MI嘴毛色基因特异条带，说明培养获得的赤狐皮肤黑色素细胞生物学状态良好。【结论】以K．SFM 为基础培养基，通过添加EGF、TPA和BPE等成分，可体外培养获得赤狐皮肤黑色素细胞。且能有效回避添)!JIICT培养细胞的潜在致癌风险。关键词：赤狐；黑色素细胞；多巴染色；透射电镜中图分类号：$865．23 文献标志码：A Isolationand vitro culture／nof fromthe melanocytes skinofred fox(VUlpesvulpes) BAO Fu-he+ Jia-rong，LIUXue—qing，YUEZhi-gang，YANG AnimalandPlant State of (Institute Sciences，Chinese Sciences／Jilin ofSpecial AcademyofAgricultural KeyLaboratory AnimalMolecular 1301 12，China) Special Biology，Changchun