胡杨休眠茎尖的包埋玻璃化法冷冻保存研究.pdfVIP

新疆农业科学2017，54(12)：2232—2238 Sciences XinjiangAgricultural doi：10．6048／j．issn．1001-4330．2017．12．010 胡杨休眠茎尖的包埋玻璃化法冷冻保存研究 张玲，田洪涛，刘锦涛，刘艳萍 (塔里木大学生命科学学∥新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护利用重点实验室，新疆阿拉尔843300) 摘要：【目的】建立适合胡杨休眠茎尖的冷冻保存方法，对珍稀濒危植物胡杨种质资源进行保存。【方法】取 深冬胡杨休眠茎尖，无菌处理后，包埋在3％褐藻酸钙胶球中，对包埋后的胶球进行蔗糖预培养，预培养后的 胶球再用玻璃化保护液进行处理。研究预培养过程中蔗糖浓度、预培养时间及不同玻璃化保护液和处理时间 对胡杨休眠茎尖存活率的影响。【结果】含有休眠茎尖的褐藻酸钙胶球在0．8mol／L蔗糖溶液中预培养24h， 经玻璃化保护液[40％甘油+45％(0．4mol／L)蔗糖+10％聚乙二醇(4 000)+5％二甲基亚砜]，于室温下处 理30 min后弭进行冷冻保存，可以获得较好的存活率。【结论】在优化的条件下，胡杨休眠茎尖存活率可高达 77％，对保存后i_l：}生的幼芽进行遗传稳定性检测，未发现变异。采用液氮冷冻保存胡杨休眠茎尖是可行的。 关键词：胡杨；休眠苇尖；冷冻保存：包埋玻璃化法 中图分类号：$722 文献标识码：A 文章编号：1001—4330(2017)12—2232—07 化法冷冻保存胡杨休眠茎尖的研究尚未见报道。 0 引言 研究适合胡杨休眠茎尖的冷冻保存方法。【拟解 【研究意义】胡杨(Populuseuphratica)是国家决的关键问题】研究采用包埋玻璃化法对胡杨深 3级珍稀濒危植物，具有较强的抗干旱、抗盐碱能 冬休眠茎尖进行了液氮冷冻保存的研究，确定预 力，是荒漠绿洲地区的主要造林树种。对荒漠绿 培养过程中蔗糖浓度、预培养时间及不同玻璃化 洲地区的防风固沙及水土保持有着重要作用。胡 保护液及处理时f日qx寸胡杨休眠茎尖存活率的影 杨林种群自然更新能力低，应采取合适的措施对 响，在优化的条件下，研究建立适合胡杨休眠茎尖 胡杨种质资源进行保存¨。j。建立适合胡杨休眠 的冷冻保存方法。对保存后的茎尖采用相关序列 茎尖的冷冻保存方法，对保存珍稀濒危植物胡杨 扩增多态性(Sequence--relatedamplifiedpolymor- 种质资源具有重要意义。【前人研究进展】液氮 phism，SRAP)进行遗传稳定性检测。 冷冻保存植物种质操作简译，不需要复杂的设备， l 材料与方法 且保存时间较长，保存后的材料遗传稳定性不受 影响一。7]。胡杨种子在常温常湿条件下，7d种子 1．1 材料 活力即大幅下降，15d即失去萌发能力婶J，因此 取深冬胡杨休眠枝条，自来水浸泡24h后， min 实验尝试对胡杨休眠芽进行液氮冷冻保存的研 自来水冲洗lh，然后用10％NaCl0浸泡10 究。包埋玻璃化液氮冷冻法兼具包埋脱水法和玻 后，75％酒精浸泡20min，用无菌水冲洗2～3遍。 璃化法的优点，保存后的材料有较高的存活率，且 超净工作台上剥取2—3mm茎尖进行包埋。 可以直接成苗[9。121。【本研究切人点】目前采用 1．2方法 该法保存了多种植物’”-ls]，但是采用包埋玻璃1．2．1制胶 收稿日期(Received)：2017—09—08 基金项目：国家自然科学基金项目“超干处理对塔里木盆地四种珍稀濒危植物种子活力影响机理的