样品和基质.pptVIP

断送到 飞行时间质谱仪 飞行时间Time-Of-Flight质谱仪 质谱法:通过将样品转化为运动的气态离子并按质荷比(M／Z)大小进行分离并记录其信息的分析方法。所得结果以图谱表达，即所谓的质谱图（亦称质谱，Mass Spectrum-MS）。 Time-Of-Flight Mass Spectrometry（TOF-MS）所用的质荷比(M／Z)分离方法是现在最成熟，最广泛应用的方式。 典型质谱图 基质辅助激光解吸电离Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization (MALDI) 样品由探针送入质谱仪检测 针对非挥发性化合物的解吸/电离方式 基质 – 能量吸收剂负责把激光的能量转化为热能,正是这个转化推动了解吸电离过程 这个解吸电离作用在80年代由德国和日本的研究小组发现 田中耕一(KOICHI TANAKA)由于在发现生物大分子的激光解吸作用中的贡献分享了 2002的诺贝尔化学奖 样品和基质 基质的重要特性 激光波段的高吸收性 和样品能很好的共同结晶 产生的峰不会和样品的谱线发生干扰 不易产生多重质子化(多电荷)现象 常用的基质 CHCA (α-氰基-4-羟基肉桂酸) 基质离子通常 600 Da 产生多重质子化的蛋白质离子 SPA (sinapinic acid) 高质荷比的基质峰 少量的多重质子化现象 飞行时间方法Time-Of-Flight的原理 飞行时间Time-Of-Flight 方程 质谱的解读 M/z: 质量电荷之比 离子的形态和在质谱中的解读 母分子离子: 由于带上一个带电离子产生 (通常是一个质子) (M+H)+ 伪分子离子: 产生的原因是由于带多个质子产生;带上了一个或多个不是质子的带电离子; 由多个母分子离子聚成; 或者后面两者的结合产物 (M+2H)+2, (M+Na)+, (2M+H)+, (2M-H+2Na)+ 离子偏转–防止检测器的过载 对低分子量的离子进行偏转 采取了离子偏转之后的效果 分辨率（I） 所谓分辨本领，是指质谱仪分开相邻质量数离子的能力，一般定义是：对两个相等强度的相邻峰，当两峰间的峰谷不大于其峰高50％时，则认为两峰已经分开。 分辨率（II） 分辨率是在分子量相近的离子时产生独立信号的能力 相似的指标可以比做色谱效能 分辨率是没有单位的 用m/?m来参数， ?m是半峰宽 分辨率的计算 =峰顶/半峰宽(FWHM-Full Wave at Half Maximum) 谢谢！ * *  徐海斌 整台仪器主要由三大系统组成：真空系统；高压系统；激光系统。 差异图 试验组 对照组 胶图TM 离子以相同的能量被加速并离开离子源. 不同质量的离子有不同速度,所以它们到达检测器的时间就不一样。 检测器 无场区域 离子源 时间轴 E = 1/2 mv2 = z ·U 此处 v = x t ?x2 2U 是常数用K表示, m/z = K · ?t2 x2 2U · t2 m/z = v2 2U = m/z U, 加速电压恒定,带电相同的粒子获得的动能相同 最后质荷比只与粒子到达监测器的时间有关 M/z = MWanalyte + S(MWcs) S Charge cs = 带电离子 V1 V1 Repeller Source Lens Ext.. Lens Gnd. Lens Image Plane 时间延迟聚焦Time Lag Focusing: 延迟阶段Lag Period s x Repeller Source Lens Ext.. Lens Gnd. Lens V1 V2 Image Plane 时间延迟聚焦Time Lag Focusing: 离子提取阶段 Ion Extraction Period V1 V2 Ext. Potential S position s x d d 源极块 样品柱 高压触点 蛋白质芯片条 + 偏转金属板 分离极 推斥极 接地极 离子 检测器 偏转极 + + 0 V 0 V 0V零电压在 td 之后 分离极 推斥极 接地极 离子 检测器 偏转极 - V 0 V + + - V 负电压在 t0到 td + 0 2500 5000 7500 0 2500 5000 7500 Deflector 0 Deflector 1000 Deflector 2000 Deflector 4000 Deflector 8000 0 10 20 30 0 2500 5000 7500 1084.8+H 1638.6+H 3496.0+H 5806.3+H 7029.7+H 0 10 20 30 40 50 0 2500 5000 7500 1084.6+H 1638