国人正常颅内动脉及颅内动脉瘤相关基因表达谱的初步研究-外科学专业论文.docxVIP

中山大学博士学位论文 中山大学博士学位论文 国人正常颅内动脉及颅内动脉瘤相关基网表达毋昀翅垄婴究 国人正常颅内动脉及颅内动脉瘤 相关基因表达谱的初步研究 专 业 神经外科学 博士研究生 李明昌 导 师 黄正松教授 中山大学附属第一医院神经外科510080 摘 要 研究背景 蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage，SAH)是出血性中风较为常见 的原因，约占中风的5％～15％。颅内动脉瘤(intracrartial aneurysm，IA)是颅 内动脉壁向外突出形成的瘤样病变，其破裂是引起SAH的最主要原因，约占SAH 的75％～90％，临床病情凶险，死亡率、致残率极高，不仅严重威胁着患者的 生命健康，而且给家庭和社会带来沉重的负担。目前n在诊断上采用的影像学 手段如CT(计算机断层扫描)、MIu(磁共振成像)和DSA(数字减影血管造 影)等，均不同程度上存在有创性、漏诊率较高、费用昂贵等缺点。而治疗上， 尽管随着显微手术技巧和神经介入放射学的发展，IA破裂患者死亡率近年来有 所下降，然而，n一旦破裂，即使经过积极地抢救，仍有相当一部分患者死亡 或致残，总体预后欠佳。造成这种局面的主要原因是由于人们对IA的发病机制 还未完全弄清。对n的基因表达谱进行研究并将其与正常颅内动脉的基因表达 谱进行比较，不仅有助于从分子水平认清IA的发生发展机制，而且可以为IA 的筛选和诊断提供有效的分子标记物，并有望为IA的防治提供新的分子靶点， 中山犬学博上学位论文 中山犬学博上学位论文 国人正常颅内动瞰及颅内动脉瘤相关基因表达谱的初步研究 最终有望改变当前IA的诊治格局。 国外学者曾用改良基因表达序列分析法对1例3岁女童大脑中动脉远端多发 IA组织的基因表达谱进行了研究，结果显示IA的形成与破裂是多种基因产物共 同作用的结果。但是，由于该项研究的对象仅为l例儿童IA患者，发生部位为 少见的大脑中动脉，且该动脉瘤为感染性，其建立的基因表达谱不能代表所有IA 的基因表达谱，其形成的分子机制不足以阐明大部分IA的病理发生机制。此外， 改良基因表达序列分析法不仅样本需要量大、操作过程复杂、费时费力，而且敏 感性较低，因而不适于对n患者进行大规模基因表达谱分析。 基因芯片是二十世纪九十年代后期飞速发展起来的一种前沿生物学技术，在 基因表达谱分析方面具有其独特的高效率、高通量、自动化等特点，利用该技术 目前已经在多种疾病的发病机制研究中显示出强大的应用价值，并已成为当前最 受欢迎的研究手段之一。应用该技术在全基因组水平对正常成人颅内动脉、胎儿 颅内动脉及颅内动脉瘤的基因表达谱进行研究，目前国内外尚未见报道。 研究目的 1．建立正常颅内动脉的基因表达谱，为下一步研究颅内动脉相关性疾病的发 病机制提供理论基础； 2．探讨胎儿颅内动脉与成人颅内动脉基因表达谱的差异，寻找与颅内动脉发育 相关的基因，为研究颅内动脉发育障碍性疾病的病理机制提供理论依据； 3．应用基因芯片技术分析颅内动脉瘤与正常颅内动脉基因表达谱之间的差异， 从分子水平阐明颅内动脉瘤的发病机制，为寻找颅内动脉瘤的早期诊断和筛 选提供可能的分子标记物，同时为颅内动脉瘤的防治提供潜在的分子靶点。 研究方法 1．收集3例意外死亡的中国正常成年男性颅内Willis’动脉环及主要分支，抽提 动脉组织中的总RNA，体外逆转录为eDNA，反转录为生物素标记的cRNA， 片段化后与Affymetrix基因芯片公司的人类基因组芯片U133A杂交，扫描 杂交信号并用专用分析软件进行数据处理和分析； 2．收集3例意外流产的正常胎儿颅内willis’动脉环及主要分支，抽提组织中的 Il !些盔兰堡主兰垡堡塞 !些盔兰堡主兰垡堡塞 里△垩堂堕堕垫壁丝堕堕塑壁堕塑羞堇堕耋堕堕塑塑生塑翌 总RNA，体外逆转录为cDNA，反转录为生物素标记的cRNA，片段化后与 Affymetrix公司的人类基因组芯片U133A杂交，扫描杂交信号并用专用分析 软件分析，同时将结果与正常成人颅内动脉基因表达谱进行比较，找出差异 表达的基因，同时随机挑选3个基因用荧光定量RT-PCR对结果进行验证； 3．收集3例手术切除的颅内动脉瘤标本，抽提组织中的总RNA，体外逆转录 为cDNA，反转录为生物素标记的cRNA，片段化后与Affymetrix公司的人 类基因组芯片U133A杂交，扫描杂交信号并用专用分析软件进行数据处理 和分析，并将结果与正常成人颅内动脉基因表达谱进行比较，筛选出颅内动 脉瘤中差异表达的基因。 研究结果 1．在所检测的总共22，215个基因中，有9,653个基因在正常颅内动脉组织中呈 阳性表达。选取信号值在前500位的基因进行功能分类，发现表达数量位于 前3位的基因分别是：基因，蛋白表达类、代谢相关类和结构／运