人教版高中生物选修3课件1.2基因工程的基本操作程序-(共35张PPT).pptVIP

基因工程的基本操作程序 （二）获取目的基因的方法 * * 1、基因工程包括哪些步骤？ 3、基因工程中的核心环节是哪一步？ 4、基因表达载体导入到受体细胞有哪些方法？ 5、目的基因导入受体细胞就会成功表达吗？ 如何检测和鉴定？ 2、什么是目的基因？获取的方法有哪些方法？ 思考讨论问题： 一、目的基因的获取 二、基因表达载体的构建 三、将目的基因导入受体细胞 四、目的基因的检测与鉴定 主要是指编码蛋白质的结构基因 (一）目的基因 　 目前被广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、植物抗病基因、人胰岛素基因等。 一、目的基因的获取 1、从基因文库中获取 2、PCR技术扩增 3、人工合成 —— 核心 二、基因表达载体的构建 编码区 非编码区 非编码区 启动子 启动子：位于基因首端一段能与RNA聚合酶结合并能起始mRNA合成的序列。没有启动子，基因就不能转录。 RNA聚合酶:能够识别启动子上的结合位点并与其结合的一种蛋白质. 终止子：终止转录。 终止子 编码区 非编码区 非编码区 启动子 终止子 A G G T C A C G T C G T C C A G T G C A G C RNA聚合酶 A G G U C A C G U C G 基因表达载体的组成： b、目的基因 a、启动子 c、终止子 d、标记基因 e、复制原点 1、下列属于获取目的基因的方法的是 ①利用mRNA反转录形成 ②从基因组文库中提取 ③从受体细胞中提取 ④利用PCR技术 ⑤利用DNA转录 ⑥人工合成 A.①②③⑤ B.①②⑤⑥ C.①②③④ D.①②④⑥ 小试牛刀 2、有关基因工程的叙述中，错误的是 A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、限制性内切酶用于目的基因的获得 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、人工合成目的基因不用限制性内切酶 小试牛刀 3、1997年，科学家将动物体内的能够合成胰岛素的基因与大肠杆菌的DNA分子重组，并且在大肠杆菌中表达成功。请据右下图回答问题。 (1)此图表示的是采取__________合成基因的方法获取__________基因的过程。 (2) 图中①DNA是以_________ _________ 为模板，形成单链DNA，在酶的作用下合成双链DNA，从而获得了所需要的目的基因。 人工 目的 控制胰岛素合成的信使RNA 小试牛刀 (3) 图中③代表 　， 它往往含 　基因，以便对 目的基因的检测。 重组DNA分子 标记 将目的基因导入受体细胞 － 转化 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 显微注射技术 感受态法 受体细胞 植物细胞 动物细胞 原核细胞 常用的受体细胞： 有大肠杆菌、枯草杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 将目的基因导入受体细胞的原理 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 农杆菌转化法 适用于 双子叶植物 裸子植物 显微注射技术 目的基因的表达和检测 接种实验 抗原－抗体杂交法 DNA-RNA分子杂交法 DNA分子杂交法 受体是否具有 转基因特征 个体水平 目的基因是否翻译 目的基因是否转录 目的基因是否导入 分子水平 方法 检测对象 DNA分子杂交法 DNA分子杂交 1、从基因文库中直接获取 （1）基因文库的概念 部分基因文库： 基因组DNA文库： 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库 含有一种生物的全部基因 只包含了一种生物的部分基因，如:cDNA文库 　为什么cDNA文库中不含启动子、内含子？ 原核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 编码区上游 编码区下游 调控遗传信息的表达 (调控序列) 转录RNA (编码序列) 编码区 非编码区 (下游) 非编码区 （上游） (与RNA聚合酶结合位点) 启动子 (转录终止标记) 终止子 原核细胞的基因结构 包括若干个 结构基因 启动子 .VS. 起始密码 /终止子 .VS. /终止密码 存在分子： 作用： DNA 启动/终止转录 mRNA 起始/终止翻译 mRNA中存在启动子/终止子的序列吗？ 编码区 非编码区 非编码区 外显子 (能编码蛋白质) 启动子 内含子 (不能编码蛋白质) 真核细胞的基因结构 终止子 　真核细胞的一个基因的编码区转录出mRNA前体， 需把其中的内含子切除，外显子拼接成成熟mRNA。 (结构基因)