国内分离的致肾盂肾炎大肠埃希菌papA和papG基因分型的研究-病原生物学专业论文.docxVIP

天津医科大学博士学位论文国内分离的致肾盂肾炎大肠埃希菌 天津医科大学博士学位论文 国内分离的致肾盂肾炎大肠埃希菌 papA和papG基因分型的研究 博士研究生：吴庆刚导师：陈锦英 中文摘要 尿路感染是一种常见病、多发病，大肠埃希菌为其主要致病菌，导致 上行性尿路感染的大肠埃希菌大多具有P菌毛，称为致肾盂肾炎大肠埃希 菌(UPEC)。编码P菌毛的粘附基因群(pap)位于UPEC的染色体上，由 11个基因组成，其中papA编码P菌毛的主要菌毛结构亚单位，papG编 码P菌毛尖端与屎道上皮细胞表面受体Gal．．Gal结合的真正粘附素。近年 来，UPEC papA和papG因在P菌毛组成和粘附致病中的重要作用而成为 研究的焦点，尤其对papA和papG的基因分型研究在UPEC的流行病学、 致病机理、遗传变异和免疫防治研究中的作用在国外越来越引起人们的关 注．国内尚处于空白。 首先，本研究建立了UPECpapC PCR的方法，在其扩增片段内设计了 PstI内切酶位点，可用于PCR产物的鉴定，提高该方法的特异性。采用 上述方法对国内分离的147株尿源性大肠埃希菌进行检测，UPEC菌株检 出率为31．98％(47／147株)。与血凝试验相比较，两种方法检测结果无明 显差异(PO．05)。继而采用多重PCR方法对45株UPEC菌株分别进行 了papA和paps的基因分型，探讨国内UPEC菌株的papA和papO的基 因组合形式。结果显示，45株UPEC papG的基因型均为Ⅱ型，与国外报 道显著不同。其中44株(97．8％)papA基因分型结果阳性，1株(2．2％) DapA结果阴性，预示为新的papA基因型。44株UPEC papa分型结果表 天津医科大学博士学位论文明，24株(54．55％)具有1个基因型，13株(29．55％)具有2个基因型， 天津医科大学博士学位论文 明，24株(54．55％)具有1个基因型，13株(29．55％)具有2个基因型， 4株(9．09％)和3株(6．82％)分别具有3个和4个基因型。单一基因 型较常见的为F7-2(25．00％)、F1l(6．82％)和F16(9．09％)。受试菌株 各种基因型出现的频次，优势基因型依次为：F10和F13各12株(27．27％)、 F7—2和F11各11株(25．00％)、F1410株(22．72％)和F16 9株(20．45 ％)；具有2个以上基因型的组合形式与国外不同，并首次发现了4个基 因型(FS+F9+F13+F14)组合的UPEC菌株。表明国内UPEC菌株存在 papA的多态性。 同时，采用PCR克隆的方法对papA多重PCR不能分型的UPEC 4030 株的papa和papG基因克隆和序列分析，结果显示，papA由720个核苷 酸组成，编码192个氨基酸的多肽。与国外报道的10个基因型的papA 核苷酸序列和推导氨基酸序列同源性比较，分别为36．11～77．95％和 21．11～78．34％；与papA基因分型多重PCR引物比较，UPEC4030在各 基因型下游引物相应位置序列同源性仅为10～66．67％，表明该菌株papa 确实为新基因型，并验证了papA基因分型方法的可靠性。UPEC4030与 天津地区曾报道UPECl32(F13型)papA核苷酸和推导氨基酸序列比较， 其同源性分别为49．70％和46．18％，变异部位主要出现在可变区和 Cys．Cys区：但papG均为Ⅱ型，其核昔酸和推导氨基酸序列同源性分别为 98．89％和99．01％。 综上所述，国内分离UPEC菌株papG高度保守；而papA呈现高度 多态性，并出现与I塞lJl,不同的基因型，有关l|缶床和流行病学意义值得深入 研究。 关键词：致肾盂肾炎大肠埃希菌粘附papa papG基因分型 天津医科大学博士学位论文Studies 天津医科大学博士学位论文 Studies on papA and papG Genotyping of Uropathogenic Escherichia coil Strains Isolated in China Ph．D．Candidate：Wu qinggang Supervisor：Professor Chen Jinying Ti舭ji．Medical University(Tianjin 300070) Abstract Urinm7 tract infection 6yrI)is a c4Ⅲllmon and fi,equently occurring disease． Escherichia coli is its pmogco．Most E．∞li isolated from Iine of删酬临with upper urinary tract