抗生素类药物的分析-详细解释各类抗生素特点.ppt

3. 蒸发光散射检测器测定庆大霉素C组分（Ch.P 2005） 任何挥发性低于流动相的样品均能被检测 ELSD检测分为三个步骤：（1）用惰性气体雾化脱洗液（2） 流动相在加热管（漂移管）中蒸发（3）样品颗粒散射光后得到检测。 溶液浓度的对数值与相应的主峰面积对数值成正比 流动相：0.2mol/l三氟醋酸-甲醇（92：8） 流速：每分钟0.6ml 定量方法：标准曲线法，3个浓度，相关系数应不小于0.99 规定 C1 25~50% C1a 15~40% C2a +C2 20~50% （四）硫酸盐测定（组分分析） 硫酸萘替米星：取本品约0.12g，精密称定，加水100ml使溶解，用浓氨溶液调节pH值至11后，精密加氯化钡滴定液(0.1mol/L)10ml、酞紫指示液5滴，用乙二胺四醋酸二钠滴定液(0.05mol/L)滴定，注意保持滴定过程中的pH值为11，滴定至紫色开始消褪，加入乙醇50ml，继续滴定，至蓝紫色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。本品含硫酸盐按无水物计算应为31.5％～35.0％。 三、含量测定 HPLC法： 蒸发光散射法：依替米星、卡那霉素 衍生化法：阿米卡星 微生物检定法：链霉素、庆大霉素、 萘替米星 第四节 四环素类抗生素 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 4a 5a D C B A 基 本 结 构 四环素（TC）tetracycline 6 金霉素 (CTC) chlortetracycline 氯四环素 链霉胍 链霉糖 N-甲基-L- 葡萄糖胺 碱性 水溶性 旋光性 有紫外吸收 230nm 稳定性 巴龙霉素（Ⅰ，Ⅱ） D-葡萄糖胺 脱氧链霉胺 巴龙胺 D-核糖 巴龙霉糖 巴龙二糖胺 R1、R2：-CH2NH2 庆大霉素 糖 苷元 绛红糖胺 + 脱氧链霉胺 + 加洛糖胺 糖 绛红糖胺 紫素胺 2-脱氧链霉胺 加洛糖胺 复合物 碱性 水溶性 旋光性 性质稳定 无紫外吸收 R2 O C R 3 R 1 HN N H 2 O O H H 2 N N H 2 O O O H N H C H 3 O H C H 3 2 二、鉴别 （一）茚三酮反应 原理：具有羟基胺和α-氨基酸的性质 △ + △ 蓝紫色 （二）Molisch试验 具有五碳糖或六碳糖结构 H+ 糠 醛 羟甲基糠醛 α-萘酚 红紫色 蒽酮 蓝紫色 糠醛与α-萘酚呈色原理 红紫色 羟甲基糠醛 糠醛与蒽酮的呈色原理 羟甲基糠醛 蓝紫色 例：阿米卡星的鉴别反应：取本品约 10mg，加水1ml溶解后，加0.1%蒽酮的硫酸溶液4ml，即显蓝紫色。 （三） N-甲基葡萄糖胺反应 乙酰丙酮 OH- 吡咯衍生物 对二甲氨基苯甲醛 H+ 樱桃红色 （Elson-Morgan反应） 新霉素 巴龙霉素 (缩合) 樱桃红色 对二甲氨基苯甲醛 H+ 硫酸巴龙霉素 鉴别 取本品约10mg，加水1ml 溶解后，加盐酸溶液(9→100)2ml ，在水 浴中加热10分钟，加8 ％氢氧化钠溶液2ml 与2 ％乙酰丙酮溶液1ml ，再在水浴中加热 5 分钟，冷却后，加对二甲氨基苯甲醛试液1ml ，即显樱桃红色。 （四）麦芽酚反应 链霉素特有反应 H+ 分子重排 紫红 麦芽酚 硫酸链霉素的鉴别方法： 取本品约20mg，加水5ml溶解后，加氢氧化钠试液0.3ml，置水浴上加热5分钟，加硫酸铁铵溶液0.5ml，即呈紫红色。 链霉素特有反应 （或α-萘酚） 8-羟基喹啉 （五）坂口反应 α-萘酚 ＋ 橙红色 8－羟基喹啉 链霉胍 硫酸链霉素的鉴别方法： 取本品约0.5mg，加水4ml溶解后，加氢氧化钠试液2.5ml与0.1%8-羟基喹啉的乙醇溶液1ml，放冷至约15℃，加次溴酸钠试液3滴，即显橙红色。 坂口反应 N-甲基葡萄 糖胺反应 麦芽酚反应 （六）硫酸盐反应 H+ 盐酸or硝酸 不溶 （七）色谱法： 1.TLC 多以硅胶为薄层板，三氯甲烷-甲醇-浓氨水为展开剂，茚三酮或碘蒸汽为显色剂。 2.HPLC （八） UV法 庆大霉素无UV吸收 BP2005: 240~330nm无吸收 （九） IR法 三、检查 （一）链霉素杂质 链霉素B（甘露糖链霉素） 1. 来源 反应中间体 菌种 链霉素B 链霉素 2 方法 TLC 对照品法 硫酸－甲醇