海洋微藻的分离及鉴定方法的初步研究-水产养殖专业论文.docxVIP

海洋微藻的分离及鉴定方法的初步研究答辩委员会成员签字： 海洋微藻的分离及鉴定方法的初步研究 答辩委员会成员签字： 独创 独创 声 明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表 或撰写过的研究成果，也不包含未获得 (洼；翅遗直基他霞墨 挂别壹盟的：奎拦丑窒≥或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的 同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：功U绛 签字日期：砂l／年期劣日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意以下事项： 1、学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被 查阅和借阅。 2、学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影 印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学“中国学术期刊(光 盘版)电子杂志社用于出版和编入CNKI《中国知识资源总库》，授权中国科学技术信息 研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。(保密的学位论文在解密后适 用本授权书) 学位论文作者签名：狮坪 导师签字： 签字日期：7,,oIt年岁月z多日 签字日期：伽11年S月瑶日 海洋微藻的分离及鉴定方法的初步研究摘要 海洋微藻的分离及鉴定方法的初步研究 摘要 海洋微藻是海洋生态系统中的最主要初级生产者，也是海洋生物资源的重要 组成部分，具有种类多、数量大、繁殖快等特点，在海洋生态系统的物质循环和 能量流动中起着极其重要的作用。同时，微藻本身营养丰富，富含人类必须的蛋 白质，氨基酸、不饱和脂肪酸、多糖、类胡萝卜素等生物活性物质，在基础生物 学研究、水产养殖、新能源的开发、药物研制等领域具有重要开发价值。我国海 洋微藻资源丰富，已记录的近2000种。近年来，随着陆地资源的衰竭，丰富的 海洋微藻资源成了人们关注的热点，从海洋中获取更多高值的微藻品种成为一项 重要的基础性工作。 微藻的鉴定及分类是藻类研究的基础，也一直是较为困难的课题之一。传统 的微藻鉴定方法主要依赖于显微镜对微藻形态结构的观察和一些藻体所固有的 生理生化特性。但是对于微微型的藻类，其可以识别并用于描述和物种鉴定的形 态学特征非常少，与近缘种之间的差异非常不明显。在普通光学显微镜下，很难 确定其准确的分类地位。 分子生物学方法由于操作容易和结果直接可靠，被广泛的用于微藻的分类鉴 定和系统进化研究中。通过选择有代表性的序列片段作为分类标准，来区分不同 生物间，同种生物种内株系之间的遗传差异就成为当前研究的主要方向，为微藻 的鉴定工作提供了一个新的有效方法。 通过涂平板的方法，从青岛近海分离得到一株海洋微藻。通过普通光学显微 镜观察，同时结合扫描电子显微镜和透射电子显微镜进行制片观察，并测定其 18S rRNA基因(rDNA)序列来确定其准确的分类地位。将获得的18S rDNA与 GenBank上已经登录的序列进行BLAST比对，结果显示，其序列与微拟球藻属 的一个种：Nannochloropsis gaditana完全一致。进化树分析显示，该藻株与所有 的N．gaditana株系聚为一支，而与其他的种区别开来。因此，推测该藻株可能为 微拟球藻属的一个种：N．gaditana。 Hibberd(1981)确定了微拟球藻属的分类地位，目前命名的有7个种。该 属主要分布于海洋环境中，淡水和半咸水中比较少见。由于其能积累较高水平的 高不饱和脂肪酸而具有较好的工业应用前景，同时被广泛的作为能量食物用于 l 育苗中。该属所有的种都很微小，长椭圆形，直径约2微米，在形态学特征上几 育苗中。该属所有的种都很微小，长椭圆形，直径约2微米，在形态学特征上几 乎没有区别。这些藻超微结构也非常简单，通过光学显微镜和电子显微镜也难以 区别。其分类主要通过18S rDNA和ITS序列分析。 本研究利用18S rDNA和ITS序列分析了分离自不同地方的6株微拟球藻，并 分析了它们之间的亲缘关系。结果显示：所有的藻株的序列与NCBI登录的 N．oceanica--致，而与其他的种类区别开来，认为该六株藻为N．oceanica的不同株 系。ITS分析显示，编号为C146和编号为Cdl的亲缘关系较近，在全部613个碱基 中，两者的碱基差异为零，为同一个序列。另外的四个株系的亲缘关系较近，与 第一组拥有10个相同的变异位点。某些株系拥有一到两个个别差异位点，证实了 ITS变异位点的丰富性。位于两个ITS区的5．8S区的总长度为160bp，在六个株系 中没有变