分子排阻色谱纯化核桃蛋白源ACE抑制肽条件优化.pdfVIP

1414ls12-13 2014 年第 27 卷第 12 期 粮食与油脂 47 分子排阻色谱纯化核桃蛋白源ACE 抑制肽条件优化 朱振宝，卢　洋，易建华，周慧江 （陕西科技大学生命科学与工程学院，　陕西西安　710021 ） 摘　要：为了得到新的ACE 抑制肽，采用分子排阻色谱对核桃蛋白碱性蛋白酶水解物进行分离、 纯化。优化了分子排阻色谱分离、纯化核桃蛋白水解物的洗脱剂、洗脱流速、上样体积和样品浓度， 比较了其纯化前后ACE 抑制活性变化、分析了不同组分RP–HPLC 图谱及其氨基酸组成。结果表 明，以Sephadex G– 15 为分离介质的色谱优化条件为：超纯水为洗脱剂、洗脱流速0.4 mL/min 、上 样体积1.5 mL 、样品浓度150 mg/mL。在此条件下，经过分子排阻色谱纯化后，得到4 个主要组分， 其中活性最高组分的ACE 抑制率达90.35 ±0.25%，其IC50 值为0.158 mg/mL。经过RP–HPLC 进 一步分离，分子排阻色谱纯化后高活性组分保留时间主要集中于10 min 、13 min 、17 min 和21 min ， 并且其疏水性氨基酸的含量得到显著富集，其中芳香族氨基酸Tyr 、Phe 的含量分别达10.46% 和 20.15%。 关键词：血管紧张素转换酶抑制肽；分子排阻色谱；纯化；疏水性氨基酸 Optimization of purification of angiotensin I-converting enzyme inhibitory peptide derived from walnut protein by size exclusion chromatography ZHU Zhen-bao ，LU Yang ，YI Jian-hua ，Zhou Hui-jiang （College of Life Science and Engineering ，Shaanxi University of Science and Technology ，Xi ’an ， 710021 ，Shaanxi ，China ） Abstract ：In order to obtain the novel angiotensin I–converting enzyme （ACE ）inhibitory peptides ， walnut protein hydrolysates prepared with Alcalase 2.4 L were isolated by size exclusion chromatography. Firstly ，the operation parameters of size exclusion chromatography such as the eluent ，the flow rate and the sample concentration were investigated. Furthermore ，the ACE inhibitory activity of different parts were assessed before and after the purification. Additionally ，the RP–HPLC map and amino acid composition of the ACE inhibitory peptides were determined. The results showed that the distilled water was the best eluent ，the elution rate was 0.4 mL/min ，the sampling volume was 1.5 mL ，th