南海深海氮循环微生物的原位培养与多样性分析-第三海洋研究所.PDF

第３８卷　第１期 应 用 海 洋 学 学 报 Ｖｏｌ３８，Ｎｏ１ 　２０１９年２月 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｐｐｌｉｅｄＯｃｅａｎｏｇｒａｐｈｙ Ｆｅｂ．，２０１９ 南海深海氮循环微生物的原位培养与多样性分析 １，２ ２ ２ ２ １ １，２ 王　蕾 ，王丽萍 ，董纯明 ，李小义 ，李登峰 ，邵宗泽 （１．宁波大学海洋学院，浙江 宁波３１５２１１；２．自然资源部第三海洋研究所、海洋生物 遗传资源重点实验室，福建 厦门３６１００５） 借助自主研发的深海水体原位定植培养系统，在南海３３００ｍ的深海水体中进行了氮循环微 摘要： 生物的原位培养．通过向富集仓中投加缓释肥（铵盐、硝酸盐和尿素）进行了为期 １７个月的原位富 集．结合高通量测序技术和分离培养的方法，对深海原位富集物及实验室二次富集物进行了微生物 多样性分析．１６ＳｒＲＮＡ基因高通量测序结果表明，在南海原位富集样品中，细菌以变形菌门丰度最 高，富集仓内脱脂棉附着介质和仓内水样中的最优势属分别为希瓦氏菌属（Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ）和科韦尔 氏菌属（Ｃｏｌｗｅｌｌｉａ）；古菌以奇古菌门为主，其中氨氧化古菌（ＡＯＡ）所占比例很高．通过平板培养分 离到１７株细菌，主要包括盐单胞菌属（Ｈａｌｏｍｏｎａｓ）、海杆菌属（Ｍａｒｉｎｏｂａｃｔｅｒ）和亚硫酸盐杆菌属 （Ｓｕｌｆｉｔｏｂａｃｔｅｒ）等．通过不同起始氮源（氨氮、硝酸盐、亚硝酸盐）和培养温度（２８℃和 １０℃），对原位 富集样品进行实验室二次富集，获得了５个富集菌群．分析发现，它们均具有较好的脱氮效果，可以 产生ＮＯ或Ｎ；这些菌群均以盐单胞菌属占绝对优势，其次为海源菌属（Ｉｄｉｏｍａｒｉｎａ）或海杆菌属， ２ ２ 其中盐单胞菌和海源菌成功获得分离．单菌功能验证表明，分离获得的盐单胞菌具有好氧反硝化能 力，其在原位环境下反硝化活性尚有待确认． 海洋生物学；氮循环；原位富集；微生物多样性；好氧反硝化；深海 关键词： ＤＯＩ：１０．３９６９／Ｊ．ＩＳＳＮ．２０９５４９７２．２０１９．０１．００１ 中图分类号：Ｐ７３５ 文献标识码：Ａ 文章编号：２０９５４９７２（２０１９）０１０００１１３ 　　氮素循环是整个生物圈物质与能量循环的关键 物群体对硝酸盐浓度的变化很敏感，微生物群落多 ［６］ 组成，也是海洋生态系统物质循环的重要组成部分， 样性增加，参与氮循环的功能基因被富集 ．近年 ［１］ 对维持海洋生态平衡和修复意义重大 ．自２０世纪 来，人们对微生物参与的氮循环各环节在海洋物质 ８０年代起，人们将海洋资源的可持续开发与利用作 循环、生态平衡、环境污染、新生产力估算等方面的 ［２］ ［７１０］ 为资源与环境科学的主要发展战略之一 ，同时国 重要作用愈加重视 ．国内研究者也相继在近海 际上也将海洋氮、磷等营养元素的生物地球化学循 各海域进行了相关的研究［１１１３］．但是参与深海氮素 ［３４］ 环列为研究重点 ．海洋氮循环是一个复杂的生 循环的有关研究不多，关于南海深海原位环境中氮 物地球化学过程，主要由微生物驱动，包括固氮过 循环微生物对各类无机氮源增加的响应情况也鲜有 程、同化作用、硝化作用、厌氧氨氧化过程和反硝化 报道． ［５］ 作用等 ．硝酸盐、亚硝酸盐和氨氮等氮素是氮循 为了认