其他有机毒物及其代谢产物的测定培训课件.pptVIP

样品采集及保存 采集现场尿样或晨尿，将尿液收集在清洁的硬质玻璃瓶或聚乙烯瓶中，可用于直接测定游离五氯酚。 * 尿中五氯酚的测定 尿中五氯酚及其钠盐的测定方法有分光光度法、气相色谱法和高效液相色谱法。分光光度法主要有4-氨基安替比林分光光度法，亚甲蓝分光光度法和藏红花分光光度法。但分光光度法灵敏度较低，干扰较多。 气相色谱法包括直接气相色谱法和衍生化气相色谱法。由于五氯酚沸点高，蒸气压小，不易气化，给直接气相色谱法带来困难，故常需先将五氯酚或五氯酚钠与重氮甲烷作用生成衍生物五氯苯甲烷后，再作气相色谱测定。这样，使操作步骤比较繁琐，而且使用的试剂苯、重氮甲烷有致癌危险。 高效液相色谱分析法测定尿中五氯酚及其钠盐是较好的方法。 * （一）4-氨基安替比林分光光度法 原理 尿中五氯酚或五氯酚钠在弱酸性条件下随水蒸气蒸馏出来，吸收在氢氧化钠溶液中，生成的五氯酚钠在铁氰化钾（氧化剂）存在下，与4-氨基安替比林作用生成蓝色安替比林染料，用二甲苯提取，在580nm波长处比色定量。 样品处理 取尿样, 加适量柠檬酸溶液和蒸馏水进行蒸馏，馏出液用100mL刻度烧杯接收。接收烧杯内先加入少量蒸馏水和氢氧化钠溶液。将冷凝管出口进入接收烧杯溶液中。当馏出液达到约100mL时停止蒸馏，将馏出液加水至100mL，待测。 * 3 样品测定 取馏出液20mL于50mL带塞试管中，加入pH = 6的柠檬酸盐缓冲液1.00mL和0.4%4-氨基安替比林溶液1.00mL，混匀。加入10%铁氰化钾1.00mL，混匀。快速加入二甲苯5.00mL，用力振摇后静置分层，取上层提取液转入比色杯，在5800nm波长处测定吸光度，按标准曲线法定量。 * (二) 亚甲蓝分光光度法 1 原理 在弱碱性溶液中，五氯酚钠可与亚甲蓝定量结合生成有色化合物，萃取后的波长660nm或590 nm处进行分光光度法测定。 2 样品处理 取尿样50 mL置于蒸馏瓶中，加盐酸1 mL和数毫升饱和碳酸氢钠溶液，放数粒玻璃珠，然后进行蒸馏，待用。 * 3 样品测定 取10 mL馏出液于比色管中，加入亚甲蓝应用液1 mL，三氯甲烷3 mL，混合，静置分层，取三氯甲烷层于比色管中，在波长660 nm或590nm处测定吸光度，按标准曲线法定量。 * （三）气相色谱 1 原理 尿样中五氯酚用正己烷提取，再用重氮甲烷甲基化试剂作用生成五氯苯甲醚，然后进行气相色谱测定。将样品与标准品在相同条件下的色谱峰的保留时间进行比较，确证尿样中是否含五氯酚，如含五氯酚，采用标准曲线法以峰高定量。 * 3 样品处理和测定 取尿样于具塞离心管中，加氢氧化钠溶液碱化后再加正己烷，振摇后，除去正己烷。酸化处理后的水相，正己烷提取，再加重氮甲烷，混合数分钟，静置，加入甲醇水溶液混合，分层后取正己烷层，测定。 * （四）高效液相 1 原理 尿样中加入盐酸后，置于沸水中，使结合型的五氯酚水解，并在碱性条件下用二氯甲烷提取部分干扰物，然后在酸性条件下用乙醚提取尿中五氯酚，浓缩后，高效液相色谱法测定。 3 样品处理和测定 取尿样于消化瓶中，加盐酸，水浴加热，后冷却至室温，转入分液漏斗中，调至碱性，二氯甲烷提取干扰物，再将溶液调至酸性，乙醚萃取，浓缩，甲醇定容，离心，取上清分析。 * 第二节 甲醇 理化性质 甲醇（methanol）又称木醇或木酒精（wood alcohol）为无色透明液体。易挥发，易燃易爆。可与水，乙醇，酮，醚，酯，卤代烃和苯混溶。 代谢及生物监测指标 甲醇主要用于溶剂，医药行业及日用化妆品行业，还是化工原料。还作防冻剂，管道脱水剂，复印，汽油燃料等。 * 甲醇具有强挥发性，所以易经呼吸道，胃肠道和皮肤吸收。 甲醇的毒性与其原形及其代谢产物的蓄积量有关。甲醇本身具有麻醉作用，可使中枢神经系统受到抑制。虽然甲醇的麻醉作用比乙醇弱，但因在体内代谢缓慢和蓄积作用而呈现了比乙醇更大的毒性。甲醇中毒引起的代谢性酸中毒和眼部损害主要与甲酸含量有关。 急性中毒以神经系统的损害，酸中毒和视神经炎为主，长期接触低浓度的甲醇会引起慢性中毒，对黏膜和皮肤有不同程度的刺激。空腹时甲醇最小中毒量为10g，2-20g可致盲，中毒致死量为120-240g。 呼吸道吸入甲醇，属于低剂量摄入，半减期较短，尿样作为生物监测指标试样，需要注意采样时间。 * 三 样品采集及保持 采集接触者班后尿或晨尿，尽快送实验室分析。采样时应注意饮酒，服药及可影响甲醇含量的其他毒物的接触情况。 四 尿中甲醇的测定 常用分光光度法气相色谱法。 （一）品红亚硫酸光度法 1 原理 在酸性介质中用高锰酸钾氧化甲醇为甲醛，甲醛用品红亚硫酸显色，与标准比色定量分析。在加入显色剂之前，须加草酸使过量高锰酸钾褪色，以免引起干扰。 * 2 样品处理和测定